Mengoptimumkan H. pylori dengan Pengekstrakan DNA Manik Magnet

pengenalan

Pengekstrakan asid nukleik berasaskan manik magnet kini merupakan arus perdana dan teknologi standard emas memainkan peranan penting dalam pengesanan molekul Helicobacter pylori (H. pylori). Hari ini, kami akan meneroka secara terperinci permohonan itu, protokol tertentu, dan prospek masa depan teknologi pengekstrakan asid nukleik berasaskan manik magnet dalam ujian asid nukleik Helicobacter pylori.

1. Permohonan: Mengapa Kaedah Manik Magnet Sangat Sesuai untuk H. pylori Ujian Asid Nukleik?

Sampel untuk H. pengesanan pylori biasanya termasuk tisu mukosa gastrik (biopsi), najis, air liur, atau plak gigi. Sampel ini adalah kompleks dalam komposisi, mengandungi sejumlah besar sel perumah, lendir, sisa makanan, asid hempedu, dan pelbagai perencat PCR.

Oleh itu, pengekstrakan asid nukleik yang cekap dan tulen adalah penting untuk memastikan ketepatan ujian asid nukleik berikutnya (seperti qPCR, PCR digital, dan urutan).

1.1 Kaedah manik magnet menawarkan kelebihan yang ketara dalam konteks ini

• Ketulenan dan Hasil yang Tinggi: Manik magnetik berkesan menyerap asid nukleik dan menghilangkan kekotoran seperti protein, polisakarida, dan lipid melalui pelbagai langkah pencucian. Mereka amat berkesan untuk menghapuskan perencat PCR dalam sampel gastrousus yang kompleks, sangat meningkatkan sensitiviti dan kekhususan pengesanan.
• Automasi dan Throughput Tinggi: Kaedah manik magnet sangat sesuai dengan automasi. Banyak instrumen pengekstrakan asid nukleik automatik tersedia yang boleh memproses berpuluh-puluh atau bahkan ratusan sampel secara serentak, meningkatkan kecekapan dengan ketara, mengurangkan kesilapan manusia, dan memenuhi permintaan ujian klinikal berskala besar dan saringan epidemiologi.
• Keselamatan dan Kesederhanaan: Keseluruhan proses dijalankan dalam plat perigi dalam yang tertutup, meminimumkan pencemaran aerosol dan mengurangkan pengendali’ pendedahan kepada reagen berbahaya, sekali gus meningkatkan biokeselamatan.
• Fleksibiliti: Kaedah ini sesuai untuk pelbagai jenis sampel, termasuk tisu gastrik, najis, dan sampel lisan, dengan pelarasan kecil kepada penimbal lisis配方 dan parameter operasi.
• Penyeragaman: Proses automatik memastikan standardisasi yang tinggi, keputusan yang boleh dipercayai, dan memudahkan perbandingan antara makmal dan kawalan kualiti.

2. Protokol: Aliran Kerja Pengekstrakan dan Pengesanan Asid Nukleik Berasaskan Manik Magnet untuk H. pylori

Berikut ialah protokol berasaskan manik magnet automatik standard untuk mengekstrak H. DNA pylori (menggunakan tisu gastrik atau sampel najis sebagai contoh):

2.1 Contoh Pra-Rawatan

Tisu Mukosa Gastrik: Letakkan tisu biopsi dalam tiub emparan yang mengandungi PBS dan homogenkan dengan teliti menggunakan pengisar tisu.

Contoh Najis: Tangguhkan sedikit (cth., 100–200 mg) of stool sample in a specific sample preservation solution or PBS buffer, vortex to mix, and centrifuge to collect the supernatant.

2.2 Pengekstrakan Asid Nukleik (Using a 96-Well Automated Extraction System)

Lysis: ambil 200 μL of the processed sample supernatant and add it to a powerful lysis buffer containing proteinase K (cth., a guanidine HCl-based denaturing salt system). Incubate at 60–70°C for 10–20 minutes to fully lyse cells and bacteria, release nucleic acids, and inactivate any potential nucleases.

Mengikat: Add binding buffer and magnetic bead suspension to the lysate and mix. Under the high ionic strength of the denaturing salt, DNA specifically adsorbs onto the surface of the magnetic beads. After incubating for several minutes, capture the bead-DNA complexes using a magnetic stand and discard the supernatant.

Mencuci:

Wash Buffer I: Biasanya mengandungi kepekatan tinggi garam dan etanol untuk mengeluarkan protein, lipid, dan kekotoran lain.

Penimbal Basuh II: Biasanya mengandungi kepekatan rendah garam dan etanol untuk menghilangkan garam dan perencat sisa.

Selepas setiap langkah mencuci, menggantung semula manik, menangkap mereka, dan buang cecair tersebut. Ulang 2–3 kali.

Pengeringan: Selepas menanggalkan penimbal basuh sepenuhnya, biarkan tiub terbuka pada suhu bilik selama beberapa minit atau sapukan haba sederhana untuk membenarkan sisa etanol menyejat sepenuhnya, mengelakkan gangguan dengan tindak balas PCR berikutnya.

Elusi: Tambah penimbal elusi rendah garam atau bebas garam (cth., Penampan Tris-EDTA atau air steril), menggantung semula manik, dan eramkan pada suhu 55–65°C selama 5–10 minit untuk mengasingkan DNA daripada manik. Akhirnya, tangkap manik menggunakan dirian magnet, dan supernatan yang terhasil mengandungi H yang telah disucikan. templat DNA pylori.

2.3 Pengesanan Asid Nukleik

Tambahkan templat DNA yang diekstrak ke PCR kuantitatif masa nyata (qPCR) sistem tindak balas.

Gen Sasaran: Gen terpelihara yang sangat spesifik yang biasa dipilih bagi H. pylori termasuk:

• Gen Urease A (ureA): Paling biasa digunakan, dengan kekhususan yang sangat tinggi.
• 16Gen S rRNA: Sangat terpelihara, sesuai untuk pengenalan peringkat genus.
• gen cagA: Gen virulensi yang digunakan untuk membezakan strain virulensi tinggi.

Reaksi: Lakukan amplifikasi dalam instrumen qPCR dan pantau isyarat pendarfluor untuk menentukan keputusan. Sampel positif akan menunjukkan ciri lengkung penguatan berbentuk S.

Kawalan Kualiti

Kawalan Dalaman (IC): Ditambah pada permulaan pengekstrakan untuk memantau kejayaan keseluruhan proses dan mengelakkan negatif palsu.

Kawalan Positif dan Negatif: Termasuk dalam setiap eksperimen untuk memastikan keberkesanan pengekstrakan dan reagen PCR.

3. Prospek dan Hala Tuju Masa Depan

Prospek untuk teknologi pengekstrakan asid nukleik berasaskan manik magnet di H. pengesanan pylori adalah luas dan akan berkembang mengikut arah berikut:

• Bersepadu Sepenuhnya “Sampel masuk, Keputusan keluar” Sistem: Trend masa depan melibatkan penyepaduan pengekstrakan asid nukleik, penguatan, dan pengesanan ke dalam cip atau kartrij mikrobendalir tunggal. Pengguna hanya perlu menambah sampel, dan instrumen secara automatik melengkapkan keseluruhan proses dan menghasilkan laporan. Ini akan sangat memudahkan operasi, memendekkan masa pengesanan (berpotensi ke dalam 1 jam), dan menjadikannya sangat sesuai untuk klinik pesakit luar, hospital penjagaan primer, dan juga kegunaan rumah.
• Pengesanan Multipleks dan Analisis Gen Rintangan Dadah: Asid nukleik berkualiti tinggi yang diekstrak melalui kaedah manik magnet menyokong ujian qPCR multipleks. Satu tindak balas bukan sahaja boleh menentukan H. pylori tetapi juga mengesan pelbagai gen rintangan dadah (cth., mutasi rintangan clarithromycin 23S rRNA, gyrA mutasi rintangan levofloxacin), mengintegrasikan diagnosis molekul dan ujian kerentanan dadah untuk memberikan panduan langsung untuk rawatan klinikal yang tepat.
• Metagenomik dan Penaipan Terikan: Pengekstrakan DNA berkualiti tinggi adalah prasyarat untuk penjujukan metagenomik (mNGS). Kaedah manik magnet boleh menyediakan templat berkualiti tinggi untuk mNGS, membolehkan penyelidikan mengenai H. pylori kepelbagaian mikrobiota, hubungan evolusi, dan interaksi dengan mikroorganisma lain dalam persekitaran mikro jangkitan, dengan itu memajukan kajian mekanistik yang lebih mendalam.
• Mempopularkan Ujian Bukan Invasif: berasaskan najis H. ujian DNA pylori (ujian antigen najis, SAT) adalah kaedah bukan invasif yang sangat baik. Kematangan pengekstrakan berasaskan manik magnet automatik akan menjadikan pemeriksaan najis berskala besar boleh dilaksanakan, sesuai untuk kanak-kanak, individu yang tidak bertoleransi terhadap endoskopi, dan pemantauan keberkesanan selepas rawatan.
• Pengoptimuman Teknologi Berterusan: Manik magnet, formulasi penimbal, dan reka bentuk instrumen akan terus dioptimumkan untuk mencapai lebih cepat (memendekkan ke dalam 20 minit), lebih menjimatkan kos (mengurangkan kos setiap ujian), dan lebih hijau (menggunakan reagen yang lebih mesra alam) pengekstrakan asid nukleik ketulenan lebih tinggi.

4. Cadangan Produk

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd. menawarkan pelbagai model manik magnet berasaskan silika yang digunakan secara meluas dalam diagnostik penyakit patogen, khususnya 160013 manik magnet, yang sesuai untuk pengekstrakan asid nukleik Helicobacter pylori. The 160013 manik magnet memberikan sensitiviti pengesanan yang sangat tinggi, membolehkan pemeriksaan awal semasa jangkitan dan masa yang berharga untuk kawalan dan pencegahan penyakit.

【Spesifikasi Produk】

Kod Produk: 160013

Kandungan Pejal: 50 mg/mL

Pembungkusan: 2 mL / 10 mL / 50 mL / 500 mL / 1000 mL

【Parameter Produk】

Kumpulan Aktif: Si-OH

Matriks Manik Magnet: Silikon Dioksida

Saiz Zarah Purata: 1.2 µm

Kekuatan Ketepuan Magnet: 65 ± 5 emu/g

【Kelebihan Produk】

Kadar penjerapan yang tinggi: Kadar pemulihan maksimum melebihi 95%.

Suspensi yang sangat baik dan sifat magnet yang kuat untuk pengendalian yang mudah.

Ketulenan dan kepekaan yang tinggi dalam pengekstrakan asid nukleik.

Proses pengeluaran matang dengan konsistensi batch-to-batch yang sangat baik.

Kesimpulan

Teknologi pengekstrakan asid nukleik berasaskan manik magnet, dengan kelebihan automasinya, daya pengeluaran yang tinggi, kesucian yang tinggi, dan keselamatan yang tinggi, telah menjadi kaedah standard emas untuk penyediaan asid nukleik dalam diagnostik molekul Helicobacter pylori. Ia bukan sahaja memastikan kebolehpercayaan ujian qPCR semasa tetapi juga berfungsi sebagai asas teknologi utama untuk memajukan pesat, tepat, dan diagnosis bukan invasif H. jangkitan pylori. Apabila teknologi molekul terus berkembang dan berintegrasi, aplikasi kaedah berasaskan manik magnet dalam bidang ini hanya akan menjadi lebih mendalam dan meluas.

Pembekal

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.ditubuhkan pada 2016 yang merupakan pengilang profesional bahan biomagnet dan reagen pengekstrakan asid nukleik.

Kami mempunyai pengalaman yang kaya dalam pengekstrakan dan penulenan asid nukleik, penulenan protein, pemisahan sel, chemiluminescence, dan bidang teknikal yang lain.

Produk kami digunakan secara meluas dalam pelbagai bidang, seperti ujian perubatan, ujian genetik, penyelidikan universiti, pembiakan genetik, dan seterusnya. Kami bukan sahaja menyediakan produk tetapi juga boleh menjalankan OEM, ODM, dan keperluan lain. Jika anda mempunyai keperluan yang berkaitan, sila hubungi kami .