Оптимизация H. Pylori с помощью экстракции ДНК с помощью магнитных шариков

Введение

Экстракция нуклеиновой кислоты с помощью магнитных шариков в настоящее время является основной технологией и золотым стандартом, играющей решающую роль в молекулярном обнаружении Helicobacter pylori. (ЧАС. пилори). Сегодня, мы подробно изучим приложение, специальные протоколы, и будущие перспективы технологии экстракции нуклеиновых кислот на основе магнитных шариков при тестировании нуклеиновых кислот Helicobacter pylori.

1. Приложение: Почему метод магнитных шариков особенно подходит для H. pylori: тестирование нуклеиновой кислоты?

Образцы для H. pylori обычно включает ткань слизистой оболочки желудка. (биопсия), табурет, слюна, или зубной налет. Эти образцы сложны по составу., содержащий большое количество клеток-хозяев, слизь, остатки пищи, желчные кислоты, и различные ингибиторы ПЦР.

Поэтому, эффективная и чистая экстракция нуклеиновых кислот имеет решающее значение для обеспечения точности последующих тестов нуклеиновых кислот. (например, qPCR, цифровая ПЦР, и секвенирование).

1.1 В этом контексте метод магнитных шариков предлагает значительные преимущества.

• Высокая чистота и выход: Магнитные шарики эффективно адсорбируют нуклеиновые кислоты и удаляют примеси, такие как белки., полисахариды, и липиды через несколько этапов промывания. Они особенно эффективны при устранении ингибиторов ПЦР в сложных образцах желудочно-кишечного тракта., значительно повышает чувствительность и специфичность обнаружения.
• Автоматизация и высокая производительность: Метод магнитных шариков легко поддается автоматизации.. Доступны многочисленные автоматизированные инструменты для экстракции нуклеиновых кислот, которые могут обрабатывать десятки или даже сотни образцов одновременно., значительно повышает эффективность, уменьшение человеческой ошибки, и удовлетворение потребностей крупномасштабных клинических испытаний и эпидемиологического скрининга.
• Безопасность и простота: Весь процесс проводится в герметичных планшетах с глубокими лунками., минимизация аэрозольного загрязнения и сокращение числа операторов’ воздействие опасных реагентов, тем самым повышая биобезопасность.
• Гибкость: Метод подходит для различных типов образцов., включая ткань желудка, табурет, и устные образцы, с небольшими корректировками буфера для лизиса и рабочих параметров..
• Стандартизация: Автоматизированные процессы обеспечивают высокую стандартизацию, надежные результаты, и облегчить межлабораторные сравнения и контроль качества.

2. Протокол: Рабочий процесс извлечения и обнаружения нуклеиновой кислоты на основе магнитных шариков для H. пилори

Ниже приведен стандартный автоматизированный протокол на основе магнитных шариков для извлечения H.. ДНК пилори (использование тканей желудка или образцов стула в качестве примеров):

2.1 Предварительная обработка образца

Ткань слизистой оболочки желудка: Поместите биопсийную ткань в центрифужную пробирку, содержащую PBS, и тщательно гомогенизируйте с помощью измельчителя тканей..

Образец стула: Приостановить небольшую сумму (например, 100–200 мг) образца стула в специальном растворе для консервации образцов или буфере PBS, вортекс для смешивания, и центрифугу для сбора супернатанта.

2.2 Экстракция нуклеиновой кислоты (Использование 96-луночной автоматической системы экстракции)

Лизис: Брать 200 мкл обработанного супернатанта образца и добавьте его в мощный буфер для лизиса, содержащий протеиназу К. (например, система денатурирующих солей на основе гуанидина HCl). Инкубируйте при температуре 60–70°C в течение 10–20 минут для полного лизиса клеток и бактерий., высвобождать нуклеиновые кислоты, и инактивировать любые потенциальные нуклеазы.

Связывание: Добавьте в лизат связывающий буфер и суспензию магнитных шариков и перемешайте.. Под высокой ионной силой денатурирующей соли, ДНК специфически адсорбируется на поверхности магнитных шариков.. После инкубации в течение нескольких минут, захватите комплексы шарик-ДНК с помощью магнитной подставки и выбросьте супернатант..

Стирка:

Промывной буфер I: Обычно содержит высокие концентрации соли и этанола для удаления белков., липиды, и другие примеси.

Промывной буфер II: Обычно содержит низкие концентрации соли и этанола для удаления солей и остаточных ингибиторов..

После каждого этапа стирки, ресуспендировать бусины, поймать их, и слить жидкость. Повторите 2–3 раза.

Сушка: После полного удаления промывочного буфера, оставьте пробирку открытой при комнатной температуре на несколько минут или примените слабый нагрев, чтобы остатки этанола полностью испарились., избежание вмешательства в последующие реакции ПЦР.

Элюирование: Добавьте буфер для элюирования с низким содержанием соли или без соли. (например, Буфер Трис-ЭДТА или стерильная вода.), ресуспендировать бусины, и инкубируйте при 55–65°C в течение 5–10 минут, чтобы диссоциировать ДНК от шариков.. Окончательно, захватите бусинки с помощью магнитной подставки, и полученный супернатант содержит очищенный H. ДНК-матрица пилори.

2.3 Обнаружение нуклеиновых кислот

Добавьте извлеченную матрицу ДНК в количественную ПЦР в реальном времени. (кПЦР) реакционная система.

Целевые гены: Обычно выбранные высокоспецифичные консервативные гены H. пилори включает:

• Ген уреазы А (мочевина): Чаще всего используется, с чрезвычайно высокой специфичностью.
• 16Ген S-рРНК: Высокая сохранность, подходит для идентификации на уровне рода.
• ген cagA: Ген вирулентности, используемый для различения штаммов с высокой вирулентностью..

Реакция: Выполните амплификацию в приборе qPCR и контролируйте сигнал флуоресценции, чтобы определить результаты.. Положительные образцы покажут характерную S-образную кривую амплификации..

Контроль качества

Внутренний контроль (IC): Добавлено в начале извлечения, чтобы отслеживать успех всего процесса и избегать ложноотрицательных результатов..

Положительный и отрицательный контроль: Включено в каждый эксперимент для обеспечения эффективности реагентов для экстракции и ПЦР..

3. Перспективы и будущие направления

Перспективы технологии экстракции нуклеиновых кислот на основе магнитных шариков в H. pylori обширны и будут развиваться в следующих направлениях::

• Полностью интегрированный “Выборка, Результат” Системы: Будущие тенденции включают интеграцию экстракции нуклеиновых кислот., усиление, и обнаружение в одном микрофлюидном чипе или картридже. Пользователям нужно только добавить образец, и прибор автоматически завершает весь процесс и генерирует отчет. Это значительно упростит работу, сократить время обнаружения (потенциально внутри 1 час), и сделать его очень подходящим для амбулаторных клиник, больницы первичной медико-санитарной помощи, и даже для домашнего использования.
• Мультиплексное обнаружение и анализ генов лекарственной устойчивости: Высококачественные нуклеиновые кислоты, извлеченные с помощью метода магнитных шариков, поддерживают мультиплексное тестирование qPCR.. Одна реакция может не только определить H. pylori, но также обнаруживают множественные гены лекарственной устойчивости. (например, Мутация устойчивости к кларитромицину 23S рРНК, мутация устойчивости к левофлоксацину gyrA), интеграция молекулярной диагностики и тестирования на лекарственную чувствительность для обеспечения прямых указаний для точного клинического лечения..
• Метагеномика и штамм-типирование: Качественная экстракция ДНК – необходимое условие метагеномного секвенирования (МНГС). Метод магнитных шариков может предоставить высококачественные шаблоны для mNGS., возможность исследования H. разнообразие микробиоты pylori, эволюционные отношения, и взаимодействие с другими микроорганизмами в микроокружении инфекции., тем самым продвигая более глубокие механистические исследования.
• Популяризация неинвазивного тестирования: Табурет на основе H. ДНК-тестирование пилори (тест на антиген в кале, СБ) отличный неинвазивный метод. Развитие автоматизированной экстракции на основе магнитных шариков сделает возможным крупномасштабный скрининг кала., подходит для детей, лица с непереносимостью эндоскопии, и мониторинг эффективности после лечения.
• Непрерывная технологическая оптимизация: Магнитные бусины, буферные составы, и конструкции приборов будут продолжать оптимизироваться для более быстрого достижения (сокращение вовнутрь 20 минуты), более рентабельный (сокращение затрат на тестирование), и зеленее (использование более экологически чистых реагентов) экстракция нуклеиновых кислот повышенной чистоты.

4. Рекомендация продукта

Шанхайская биотехнологическая компания Линцзюнь., ООО. предлагает различные модели магнитных шариков на основе диоксида кремния, широко используемых в диагностике возбудителей заболеваний., особенно 160013 магнитные бусины, которые подходят для экстракции нуклеиновых кислот Helicobacter pylori. The 160013 магнитные шарики обеспечивают чрезвычайно высокую чувствительность обнаружения, обеспечение раннего скрининга во время инфекции и драгоценное время для контроля и профилактики заболеваний.

【Характеристики продукта】

Код продукта: 160013

Солидный контент: 50 мг/мл

Упаковка: 2 мл / 10 мл / 50 мл / 500 мл / 1000 мл

【Параметры продукта】

Активная группа: Si-OH

Магнитная матрица из шариков: Диоксид кремния

Средний размер частиц: 1.2 мкм

Сила магнитного насыщения: 65 ± 5 emu/g

【Преимущества продукта】

Высокая скорость адсорбции: Максимальная скорость восстановления превышает 95%.

Отличная подвеска и сильные магнитные свойства для удобства эксплуатации..

Высокая чистота и чувствительность при экстракции нуклеиновых кислот.

Отлаженный производственный процесс с превосходной стабильностью от партии к партии.

Заключение

Технология экстракции нуклеиновых кислот на основе магнитных шариков, с его преимуществами автоматизации, высокая пропускная способность, высокая чистота, и высокая безопасность, стал золотым стандартом метода получения нуклеиновых кислот в молекулярной диагностике Helicobacter pylori.. Он не только обеспечивает надежность текущего тестирования qPCR, но также служит ключевой технологической основой для продвижения быстрых исследований., точный, и неинвазивная диагностика H. инфекция пилори. Поскольку молекулярные технологии продолжают развиваться и интегрироваться, применение методов на основе магнитных шариков в этой области станет только более глубоким и распространенным..

Поставщик

Шанхайская биотехнологическая компания Линцзюнь., ОООбыл создан в 2016 который является профессиональным производителем биомагнитных материалов и реагентов для экстракции нуклеиновых кислот..

Мы имеем богатый опыт в экстракции и очистке нуклеиновых кислот., очистка белка, разделение клеток, хемилюминесценция, и другие технические области.

Наша продукция широко используется во многих областях., например, медицинское тестирование, генетическое тестирование, университетские исследования, генетическое разведение, и так далее. Мы не только поставляем продукцию, но и можем взять на себя OEM, ОДМ, и другие потребности. Если у вас есть соответствующая потребность, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам .