Elettroforesi su gel di agarosio dell'acido nucleico demistificante

Negli esperimenti di biologia molecolare, verificarne la qualità acidi nucleici estratti mediante il metodo delle biglie magnetiche mediante elettroforesi su gel di agarosio (corsa del gel) è un passo cruciale. Tuttavia, i principianti spesso incontrano alcuni fenomeni di elettroforesi confusi. Quali informazioni si celano dietro questi fenomeni anomali? Allora come si può prevenirlo??

1. Coda di banda: Un avvertimento sulla degradazione dell'acido nucleico

Quando la fascia presenta una coda continua, simile a una sbavatura, dall'alto verso il basso, di solito indica che l'acido nucleico si è degradato. Questo potrebbe essere perché:

1. Degradazione del campione stesso (mancata gestione tempestiva dopo la raccolta o ripetuti congelamenti e scongelamenti

2. La contaminazione da nucleasi viene introdotta durante il processo operativo

3. Il tempo di conservazione dopo il cracking è troppo lungo

4. Forza di taglio meccanica eccessiva (soffi e colpi eccessivamente vigorosi)

Misure preventive: Utilizzare campioni freschi; Assicurarsi che l'ambiente sperimentale sia pulito e privo di inquinamento; Il processo operativo è delicato. Una volta completata l'estrazione, testarlo tempestivamente o conservarlo a -80 ℃.

2. Sfocatura della banda: Un segnale che indica impurità residue

Se la diffusione della banda è sfocata e il confine non è chiaro, il motivo più comune è:

1. Ioni salini residui (lavaggio incompleto

2. Contaminazione di proteine ​​o polisaccaridi

3. Residuo di etanolo (influenzando la mobilità elettroforetica

Misure preventive: Assicurarsi che tutti i liquidi di scarto siano stati completamente aspirati dopo l'ultimo lavaggio. Lasciare asciugare moderatamente le perle magnetiche (la superficie dovrebbe essere opaca ma non screpolata); Per campioni complessi, il numero di lavaggi può essere aumentato.

3. Bande sorridenti: Condizioni di elettroforesi inadeguate

Le due estremità della fascia si curvano verso l'alto in a “sorriso” forma, che di solito è correlato alle condizioni dell'elettroforesi:

1. Eccessiva intensità del campo elettrico (tensione troppo alta)

2. Raffreddamento del gel non uniforme

3. La forza ionica del tampone dell'elettroforesi non è adeguata oppure è stato riutilizzato troppe volte

Misure preventive: Ridurre opportunamente la tensione dell'elettroforesi; Utilizzare il tampone per elettroforesi appena preparato; Assicurarsi che il serbatoio dell'elettroforesi sia dotato di un dispositivo di raffreddamento adeguato.

4. Altre domande frequenti

Nessuna banda: Potrebbe essere dovuto alla perdita della perlina magnetica, Eluizione insufficiente o dimensione del campione insufficiente

Punti luminosi anomali: Potrebbe trattarsi di contaminazione da RNA (nei campioni di DNA) o contaminazione del DNA genomico (nei campioni di RNA)

Consulenza professionale: Per ogni esperimento devono essere impostati controlli positivi e negativi. Ciò aiuta a determinare rapidamente se il problema risiede nel campione stesso o nel processo di estrazione. Allo stesso tempo, ricorda che l'applicazione della colla è solo il primo passo nel controllo di qualità. Per esperimenti a valle come qPCR e sequenziamento, si consiglia di utilizzare Nanodrop o Qubit per una quantificazione precisa.

Comprendere le cause e le soluzioni di questi problemi comuni non solo può aiutarti a ottenere ottimi risultati di elettroforesi, ma sarà anche la chiave per garantire il successo degli esperimenti a valle. Buone abitudini sperimentali e operazioni tecniche meticolose sono la base per ottenere campioni di acidi nucleici di alta qualità.

Fornitore

Shanghai Lingjun Biotecnologia Co., Ltd.è stato fondato nel 2016 che è un produttore professionale di materiali biomagnetici e reagenti per l'estrazione degli acidi nucleici.

Abbiamo una ricca esperienza nell'estrazione e purificazione degli acidi nucleici, purificazione delle proteine, separazione cellulare, chemiluminescenza, e altri campi tecnici.

I nostri prodotti sono ampiamente utilizzati in molti campi, come i test medici, test genetici, ricerca universitaria, allevamento genetico, e così via. Non solo forniamo prodotti, ma possiamo anche intraprendere l'OEM, ODM, e altre esigenze. Se hai un'esigenza correlata, non esitate a contattarci .