Avmystifiserende nukleinsyreagarosegelelektroforese

I molekylærbiologiske eksperimenter, verifisere kvaliteten på nukleinsyrer ekstrahert ved magnetisk perlemetode gjennom agarosegelelektroforese (gelløping) er et avgjørende skritt. Imidlertid, nybegynnere møter ofte noen forvirrende elektroforese-fenomener. Hvilken informasjon ligger bak disse unormale fenomenene? Så hvordan kan det forebygges?

1. Band tailing: En advarsel om nukleinsyrenedbrytning

Når båndet viser kontinuerlig smøreaktig hale fra topp til bunn, det indikerer vanligvis at nukleinsyren er degradert. Dette kan være fordi:

1. Nedbrytning av selve prøven (unnlatelse av å håndtere det umiddelbart etter oppsamling eller gjentatt frysing og tining

2. Nukleaseforurensning introduseres under operasjonsprosessen

3. Lagringstiden etter sprekking er for lang

4. For stor mekanisk skjærkraft (altfor kraftig blåsing og slående)

Forebyggende tiltak: Bruk ferske prøver; Sørg for at forsøksmiljøet er rent og fritt for forurensning; Operasjonsprosessen er skånsom. Etter at ekstraksjonen er fullført, test den umiddelbart eller oppbevar den ved -80 ℃.

2. Bånd uskarphet: Et signal som indikerer gjenværende urenheter

Hvis bånddiffusjonen er uskarp og grensen ikke er klar, den vanligste årsaken er:

1. Resterende salioner (ufullstendig vask

2. Protein- eller polysakkaridforurensning

3. Etanolrester (påvirker elektroforetisk mobilitet

Forebyggende tiltak: Sørg for at all avfallsvæske suges godt opp etter siste vask. La de magnetiske perlene tørke moderat (overflaten skal være matt, men ikke sprukket); For komplekse prøver, antall vask kan økes.

3. Smilende band: Feil elektroforeseforhold

De to endene av båndet buer oppover i en “smil” form, som vanligvis er relatert til elektroforeseforholdene:

1. Overdreven elektrisk feltintensitet (for høy spenning)

2. Ujevn gelkjøling

3. Ionestyrken til elektroforesebufferen er upassende eller den har blitt gjenbrukt for mange ganger

Forebyggende tiltak: Reduser elektroforesespenningen på passende måte; Bruk nylaget elektroforesebuffer; Sørg for at elektroforesetanken er utstyrt med en passende kjøleenhet.

4. Andre vanlige spørsmål

Ingen band: Det kan skyldes tap av magnetiske perler, utilstrekkelig eluering eller utilstrekkelig prøvestørrelse

Unormale lyspunkter: Det kan være RNA-kontaminering (i DNA-prøver) eller genomisk DNA-kontaminering (i RNA-prøver)

Profesjonell råd: Positive og negative kontroller bør settes opp for hvert eksperiment. Dette bidrar til raskt å finne ut om problemet ligger i selve prøven eller ekstraksjonsprosessen. Samtidig, husk at limkjøring bare er det første trinnet i kvalitetskontroll. For nedstrøms eksperimenter som qPCR og sekvensering, det anbefales å bruke Nanodrop eller Qubit for nøyaktig kvantifisering.

Å forstå årsakene og løsningene til disse vanlige problemene kan ikke bare hjelpe deg med å oppnå vakre elektroforeseresultater, men også være nøkkelen til å sikre suksessen til nedstrømseksperimenter. Gode ​​eksperimentelle vaner og grundige tekniske operasjoner er grunnlaget for å få nukleinsyreprøver av høy kvalitet.

Leverandør

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.ble etablert i 2016 som er en profesjonell produsent av biomagnetiske materialer og nukleinsyreekstraksjonsreagenser.

Vi har rik erfaring innen utvinning og rensing av nukleinsyre, proteinrensing, celleseparasjon, kjemiluminescens, og andre tekniske felt.

Våre produkter er mye brukt på mange felt, som medisinsk testing, genetisk testing, universitetsforskning, genetisk avl, og så videre. Vi leverer ikke bare produkter, men kan også påta oss OEM, ODM, og andre behov. Hvis du har et relatert behov, ta gjerne kontakt med oss .