Demystificerende nucleïnezuur-agarosegelelektroforese

In experimenten in de moleculaire biologie, het verifiëren van de kwaliteit van nucleïnezuren geëxtraheerd door magnetische parelmethode via agarosegelelektroforese (gel hardlopen) is een cruciale stap. Echter, Beginners komen vaak een aantal verwarrende elektroforeseverschijnselen tegen. Welke informatie schuilt achter deze abnormale verschijnselen? Hoe kan het dan voorkomen worden?

1. Bandstaart: Een waarschuwing voor afbraak van nucleïnezuren

Wanneer de band van boven naar beneden een continue vlekachtige staart vertoont, het geeft gewoonlijk aan dat het nucleïnezuur is afgebroken. Dit kan zijn omdat:

1. Afbraak van het monster zelf (het niet onmiddellijk hanteren ervan na het verzamelen of herhaaldelijk invriezen en ontdooien

2. Tijdens het operatieproces wordt nucleasecontaminatie geïntroduceerd

3. De bewaartijd na het kraken is te lang

4. Overmatige mechanische schuifkracht (overdreven krachtig blazen en slaan)

Preventieve maatregelen: Gebruik verse monsters; Zorg ervoor dat de experimentele omgeving schoon en vrij van vervuiling is; Het operatieproces is zachtaardig. Nadat de extractie is voltooid, test het onmiddellijk of bewaar het bij -80℃.

2. Bandvervaging: Een signaal dat resterende onzuiverheden aangeeft

Als de banddiffusie wazig is en de grens niet duidelijk is, de meest voorkomende reden is:

1. Resterende zoutionen (onvolledig wassen

2. Verontreiniging door eiwitten of polysachariden

3. Ethanolresidu (die de elektroforetische mobiliteit beïnvloeden

Preventieve maatregelen: Zorg ervoor dat alle afvalvloeistof na de laatste wasbeurt grondig wordt opgezogen. Laat de magnetische kralen matig drogen (het oppervlak moet dof maar niet gebarsten zijn); Voor complexe monsters, het aantal wasbeurten kan worden verhoogd.

3. Lachende bands: Onjuiste elektroforeseomstandigheden

De twee uiteinden van de band buigen omhoog in a “glimlach” vorm, wat meestal verband houdt met de elektroforeseomstandigheden:

1. Overmatige elektrische veldintensiteit (te hoge spanning)

2. Ongelijkmatige gelkoeling

3. De ionsterkte van de elektroforesebuffer is niet geschikt of deze is te vaak hergebruikt

Preventieve maatregelen: Verlaag de elektroforesespanning op passende wijze; Gebruik vers bereide elektroforesebuffer; Zorg ervoor dat de elektroforesetank is uitgerust met een geschikt koelapparaat.

4. Andere veelgestelde vragen

Geen bende: Dit kan te wijten zijn aan verlies van magnetische kralen, onvoldoende elutie of onvoldoende monstergrootte

Abnormale lichtpuntjes: Het kan RNA-besmetting zijn (in DNA-monsters) of genomische DNA-besmetting (in RNA-monsters)

Professioneel advies: Voor elk experiment moeten positieve en negatieve controles worden ingesteld. Dit helpt om snel te bepalen of het probleem in het monster zelf of in het extractieproces ligt. Tegelijkertijd, onthoud dat het lijmen slechts de eerste stap is in kwaliteitsinspectie. Voor stroomafwaartse experimenten zoals qPCR en sequencing, het wordt aanbevolen om Nanodrop of Qubit te gebruiken voor nauwkeurige kwantificering.

Als u de oorzaken en oplossingen van deze veelvoorkomende problemen begrijpt, kunt u niet alleen prachtige elektroforeseresultaten behalen, maar ook de sleutel zijn tot het succes van vervolgexperimenten. Goede experimentele gewoonten en nauwgezette technische handelingen vormen de basis voor het verkrijgen van hoogwaardige nucleïnezuurmonsters.

Leverancier

Shanghai Lingjun Biotechnologie Co., Ltd.werd opgericht in 2016 dat een professionele fabrikant is van biomagnetische materialen en reagentia voor nucleïnezuurextractie.

We hebben een rijke ervaring in de extractie en zuivering van nucleïnezuren, eiwit zuivering, cel scheiding, chemiluminescentie, en andere technische gebieden.

Onze producten worden op veel gebieden veel gebruikt, zoals medische testen, genetische testen, universitair onderzoek, genetische veredeling, enzovoort. Wij leveren niet alleen producten, maar kunnen ook OEM ondernemen, ODM, en andere behoeften. Als u een gerelateerde behoefte heeft, Neem gerust contact met ons op .