Desmitificando la electroforesis en gel de agarosa con ácido nucleico

En experimentos de biología molecular., verificando la calidad de ácidos nucleicos extraídos por método de perlas magnéticas mediante electroforesis en gel de agarosa (gel corriendo) es un paso crucial. Sin embargo, Los principiantes a menudo encuentran algunos fenómenos de electroforesis confusos.. ¿Qué información se esconde detrás de estos fenómenos anormales?? Entonces ¿cómo se puede prevenir??

1. cola de banda: Una advertencia sobre la degradación del ácido nucleico

Cuando la banda muestra una cola continua en forma de mancha de arriba a abajo, generalmente indica que el ácido nucleico se ha degradado. Esto podría deberse a que:

1. Degradación de la propia muestra. (no manipularlo rápidamente después de su recolección o congelarlo y descongelarlo repetidamente

2. La contaminación por nucleasas se introduce durante el proceso de operación.

3. El tiempo de almacenamiento después del agrietamiento es demasiado largo.

4. Fuerza de corte mecánica excesiva (soplar y golpear demasiado vigorosos)

Medidas preventivas: Utilice muestras frescas; Garantizar que el entorno experimental esté limpio y libre de contaminación.; El proceso de operación es suave.. Una vez completada la extracción, pruébelo rápidamente o guárdelo a -80 ℃.

2. Banda borrosa: Una señal que indica impurezas residuales.

Si la difusión de la banda es borrosa y el límite no está claro, la razón más común es:

1. Iones de sal residuales (lavado incompleto

2. Contaminación por proteínas o polisacáridos.

3. Residuo de etanol (afectando la movilidad electroforética

Medidas preventivas: Asegúrese de que todo el líquido residual se absorba completamente después del último lavado.. Deje que las cuentas magnéticas se sequen moderadamente. (la superficie debe estar opaca pero no agrietada); Para muestras complejas, se puede aumentar el número de lavados.

3. bandas sonrientes: Condiciones de electroforesis inadecuadas.

Los dos extremos de la banda se curvan hacia arriba en una “sonrisa” forma, que generalmente está relacionado con las condiciones de electroforesis:

1. Intensidad excesiva del campo eléctrico. (voltaje demasiado alto)

2. Enfriamiento desigual del gel

3. La fuerza iónica del tampón de electroforesis es inadecuada o se ha reutilizado demasiadas veces.

Medidas preventivas: Reducir adecuadamente el voltaje de electroforesis.; Utilice tampón de electroforesis recién preparado; Asegúrese de que el tanque de electroforesis esté equipado con un dispositivo de enfriamiento adecuado..

4. Otras preguntas frecuentes

Sin banda: Puede deberse a la pérdida de cuentas magnéticas., elución insuficiente o tamaño de muestra insuficiente

Puntos brillantes anormales: Puede ser contaminación de ARN (en muestras de ADN) o contaminación del ADN genómico (en muestras de ARN)

Asesoramiento profesional: Se deben configurar controles positivos y negativos para cada experimento.. Esto ayuda a determinar rápidamente si el problema radica en la muestra misma o en el proceso de extracción.. Al mismo tiempo, Recuerde que el funcionamiento del pegamento es sólo el primer paso en la inspección de calidad.. Para experimentos posteriores como qPCR y secuenciación, se recomienda utilizar Nanodrop o Qubit para una cuantificación precisa.

Comprender las causas y soluciones de estos problemas comunes no solo puede ayudarle a lograr hermosos resultados de electroforesis, pero también será la clave para garantizar el éxito de los experimentos posteriores.. Los buenos hábitos experimentales y las operaciones técnicas meticulosas son la base para obtener muestras de ácido nucleico de alta calidad..

Proveedor

Shanghai Lingjun Biotecnología Co., Limitado.se estableció en 2016 que es un fabricante profesional de materiales biomagnéticos y reactivos de extracción de ácidos nucleicos..

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