Demystifying Asid Nukleik Elektroforesis Gel Agarose

Dalam eksperimen biologi molekul, mengesahkan kualiti asid nukleik diekstrak dengan kaedah manik magnet melalui elektroforesis gel agarose (gel berjalan) adalah satu langkah yang penting. Namun begitu, pemula sering menghadapi beberapa fenomena elektroforesis yang mengelirukan. Apakah maklumat yang ada di sebalik fenomena abnormal ini? Kemudian bagaimana ia boleh dicegah?

1. Band tailing: Amaran kemerosotan asid nukleik

Apabila jalur menunjukkan ekor seperti smear berterusan dari atas ke bawah, ia biasanya menunjukkan bahawa asid nukleik telah terdegradasi. Ini mungkin kerana:

1. Degradasi sampel itu sendiri (kegagalan untuk mengendalikannya dengan segera selepas pengumpulan atau pembekuan dan pencairan berulang

2. Pencemaran nuklease diperkenalkan semasa proses operasi

3. Masa penyimpanan selepas retak terlalu lama

4. Daya ricih mekanikal yang berlebihan (tiupan dan pukulan yang terlalu kuat)

Langkah-langkah pencegahan: Gunakan sampel segar; Memastikan persekitaran eksperimen bersih dan bebas daripada pencemaran; Proses operasi adalah lembut. Selepas pengekstrakan selesai, uji dengan segera atau simpan pada -80 ℃.

2. Band kabur: Isyarat yang menunjukkan sisa kekotoran

Jika penyebaran jalur kabur dan sempadannya tidak jelas, sebab yang paling biasa ialah:

1. Baki ion garam (basuhan yang tidak lengkap

2. Pencemaran protein atau polisakarida

3. Sisa etanol (menjejaskan mobiliti elektroforesis

Langkah-langkah pencegahan: Pastikan semua cecair buangan disedut dengan teliti selepas basuhan terakhir. Biarkan manik magnet kering dengan sederhana (permukaan harus kusam tetapi tidak retak); Untuk sampel yang kompleks, bilangan cucian boleh ditambah.

3. Kumpulan senyuman: Keadaan elektroforesis yang tidak betul

Kedua-dua hujung jalur melengkung ke atas dalam a “senyum” bentuk, yang biasanya berkaitan dengan keadaan elektroforesis:

1. Keamatan medan elektrik yang berlebihan (voltan terlalu tinggi)

2. Penyejukan gel tidak sekata

3. Kekuatan ionik penimbal elektroforesis tidak sesuai atau ia telah digunakan semula terlalu banyak kali

Langkah-langkah pencegahan: Kurangkan voltan elektroforesis dengan sewajarnya; Gunakan penimbal elektroforesis yang baru disediakan; Pastikan tangki elektroforesis dilengkapi dengan alat penyejuk yang sesuai.

4. Soalan lazim yang lain

Tiada band: Ia mungkin disebabkan oleh kehilangan manik magnetik, elusi tidak mencukupi atau saiz sampel tidak mencukupi

Tompok terang yang tidak normal: Ia mungkin pencemaran RNA (dalam sampel DNA) atau pencemaran DNA genomik (dalam sampel RNA)

Nasihat profesional: Kawalan positif dan negatif perlu disediakan untuk setiap eksperimen. Ini membantu untuk menentukan dengan cepat sama ada masalah terletak pada sampel itu sendiri atau proses pengekstrakan. Pada masa yang sama, ingat bahawa gam berjalan hanyalah langkah pertama dalam pemeriksaan kualiti. Untuk eksperimen hiliran seperti qPCR dan penjujukan, adalah disyorkan untuk menggunakan Nanodrop atau Qubit untuk kuantiti yang tepat.

Memahami punca dan penyelesaian masalah biasa ini bukan sahaja dapat membantu anda mencapai hasil elektroforesis yang indah, tetapi juga menjadi kunci untuk memastikan kejayaan eksperimen hiliran. Tabiat percubaan yang baik dan operasi teknikal yang teliti adalah asas untuk mendapatkan sampel asid nukleik berkualiti tinggi.

Pembekal

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.ditubuhkan pada 2016 yang merupakan pengilang profesional bahan biomagnet dan reagen pengekstrakan asid nukleik.

Kami mempunyai pengalaman yang kaya dalam pengekstrakan dan penulenan asid nukleik, penulenan protein, pemisahan sel, chemiluminescence, dan bidang teknikal yang lain.

Produk kami digunakan secara meluas dalam pelbagai bidang, seperti ujian perubatan, ujian genetik, penyelidikan universiti, pembiakan genetik, dan seterusnya. Kami bukan sahaja menyediakan produk tetapi juga boleh menjalankan OEM, ODM, dan keperluan lain. Jika anda mempunyai keperluan yang berkaitan, sila hubungi kami .