Électrophorèse démystifiante sur gel d’agarose d’acide nucléique

Dans les expériences de biologie moléculaire, vérifier la qualité de acides nucléiques extraits par la méthode des billes magnétiques par électrophorèse sur gel d'agarose (gel qui coule) est une étape cruciale. Cependant, les débutants rencontrent souvent des phénomènes d'électrophorèse déroutants. Quelles informations se cachent derrière ces phénomènes anormaux? Alors comment peut-on l'empêcher?

1. Bande de queue: Un avertissement de dégradation des acides nucléiques

Lorsque la bande présente une traînée continue semblable à une traînée de haut en bas, cela indique généralement que l'acide nucléique s'est dégradé. C'est peut-être parce que:

1. Dégradation de l'échantillon lui-même (défaut de manipulation rapide après la collecte ou congélation et décongélation répétées

2. Une contamination nucléique est introduite pendant le processus opérationnel

3. Le temps de stockage après fissuration est trop long

4. Force de cisaillement mécanique excessive (souffler et frapper trop vigoureusement)

Mesures préventives: Utilisez des échantillons frais; S'assurer que l'environnement expérimental est propre et exempt de pollution; Le processus de fonctionnement est doux. Une fois l’extraction terminée, testez-le rapidement ou stockez-le à -80 ℃.

2. Bande floue: Un signal indiquant les impuretés résiduelles

Si la diffusion de la bande est floue et que la limite n'est pas claire, la raison la plus courante est:

1. Ions de sel résiduels (lavage incomplet

2. Contamination par des protéines ou des polysaccharides

3. Résidu d'éthanol (affectant la mobilité électrophorétique

Mesures préventives: Assurez-vous que tous les déchets liquides sont soigneusement aspirés après le dernier lavage.. Laisser sécher modérément les billes magnétiques (la surface doit être mate mais pas fissurée); Pour les échantillons complexes, le nombre de lavages peut être augmenté.

3. Groupes souriants: Conditions d'électrophorèse inappropriées

Les deux extrémités de la bande se courbent vers le haut en “sourire” forme, qui est généralement lié aux conditions d'électrophorèse:

1. Intensité de champ électrique excessive (tension trop élevée)

2. Refroidissement inégal du gel

3. La force ionique du tampon d'électrophorèse est inappropriée ou il a été réutilisé trop de fois

Mesures préventives: Réduire de manière appropriée la tension d'électrophorèse; Utilisez un tampon d'électrophorèse fraîchement préparé; Assurez-vous que la cuve d'électrophorèse est équipée d'un dispositif de refroidissement approprié.

4. Autres questions fréquemment posées

Pas de groupe: Cela peut être dû à une perte de billes magnétiques, élution insuffisante ou taille d’échantillon insuffisante

Points lumineux anormaux: Il s'agit peut-être d'une contamination par l'ARN (dans les échantillons d'ADN) ou contamination de l'ADN génomique (dans les échantillons d'ARN)

Conseil professionnel: Des contrôles positifs et négatifs doivent être mis en place pour chaque expérience. Cela permet de déterminer rapidement si le problème réside dans l'échantillon lui-même ou dans le processus d'extraction.. En même temps, rappelez-vous que l'écoulement de la colle n'est que la première étape du contrôle qualité. Pour les expériences en aval telles que la qPCR et le séquençage, il est recommandé d'utiliser Nanodrop ou Qubit pour une quantification précise.

Comprendre les causes et les solutions de ces problèmes courants peut non seulement vous aider à obtenir de superbes résultats d'électrophorèse., mais aussi être la clé du succès des expérimentations en aval. De bonnes habitudes expérimentales et des opérations techniques méticuleuses constituent la base de l'obtention d'échantillons d'acides nucléiques de haute qualité.

Fournisseur

Société de biotechnologie Shanghai Lingjun., Ltd.a été établi en 2016 qui est un fabricant professionnel de matériaux biomagnétiques et de réactifs d'extraction d'acide nucléique.

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