Mengungkap Elektroforesis Gel Agarosa Asam Nukleat

Dalam percobaan biologi molekuler, memverifikasi kualitas asam nukleat diekstraksi dengan metode manik magnetik melalui elektroforesis gel agarosa (gel berjalan) adalah langkah penting. Namun, pemula sering kali menemui beberapa fenomena elektroforesis yang membingungkan. Informasi apa yang ada di balik fenomena abnormal tersebut? Lalu bagaimana cara mencegahnya?

1. Ekor pita: Peringatan degradasi asam nukleat

Saat pita menunjukkan noda seperti noda terus menerus dari atas ke bawah, biasanya menunjukkan bahwa asam nukleat telah terdegradasi. Ini mungkin karena:

1. Degradasi sampel itu sendiri (kegagalan untuk menanganinya segera setelah pengumpulan atau pembekuan dan pencairan berulang kali

2. Kontaminasi nuklease terjadi selama proses operasi

3. Waktu penyimpanan setelah retak terlalu lama

4. Kekuatan geser mekanis yang berlebihan (pukulan dan pukulan yang terlalu kuat)

Tindakan pencegahan: Gunakan sampel segar; Pastikan lingkungan percobaan bersih dan bebas polusi; Proses pengoperasiannya lembut. Setelah ekstraksi selesai, segera uji atau simpan pada suhu -80℃.

2. Pita kabur: Sinyal yang menunjukkan sisa kotoran

Jika difusi pita kabur dan batasnya tidak jelas, alasan paling umum adalah:

1. Ion garam sisa (pencucian tidak lengkap

2. Kontaminasi protein atau polisakarida

3. Residu etanol (mempengaruhi mobilitas elektroforesis

Tindakan pencegahan: Pastikan semua cairan limbah tersedot seluruhnya setelah pencucian terakhir. Biarkan manik magnet mengering secukupnya (permukaannya harus kusam tetapi tidak retak); Untuk sampel yang kompleks, jumlah pencucian dapat ditingkatkan.

3. Band tersenyum: Kondisi elektroforesis yang tidak tepat

Kedua ujung pita melengkung ke atas membentuk a “senyum” membentuk, yang biasanya berhubungan dengan kondisi elektroforesis:

1. Intensitas medan listrik yang berlebihan (tegangan terlalu tinggi)

2. Pendinginan gel tidak merata

3. Kekuatan ionik buffer elektroforesis tidak sesuai atau terlalu sering digunakan kembali

Tindakan pencegahan: Kurangi tegangan elektroforesis dengan tepat; Gunakan buffer elektroforesis yang baru disiapkan; Pastikan tangki elektroforesis dilengkapi dengan perangkat pendingin yang sesuai.

4. Pertanyaan umum lainnya

Tidak ada band: Ini mungkin disebabkan oleh hilangnya manik magnetis, elusi tidak mencukupi atau ukuran sampel tidak mencukupi

Titik terang yang tidak normal: Ini mungkin kontaminasi RNA (dalam sampel DNA) atau kontaminasi DNA genom (dalam sampel RNA)

Saran profesional: Kontrol positif dan negatif harus disiapkan untuk setiap percobaan. Hal ini membantu dengan cepat menentukan apakah masalahnya terletak pada sampel itu sendiri atau pada proses ekstraksi. Pada saat yang sama, ingat bahwa pengerjaan lem hanyalah langkah pertama dalam pemeriksaan kualitas. Untuk eksperimen hilir seperti qPCR dan pengurutan, disarankan untuk menggunakan Nanodrop atau Qubit untuk kuantifikasi yang tepat.

Memahami penyebab dan solusi dari masalah umum ini tidak hanya membantu Anda mencapai hasil elektroforesis yang indah, namun juga menjadi kunci untuk memastikan keberhasilan eksperimen hilir. Kebiasaan eksperimental yang baik dan operasi teknis yang cermat merupakan dasar untuk memperoleh sampel asam nukleat berkualitas tinggi.

Pemasok

Shanghai Lingjun Bioteknologi Co., Ltd.didirikan pada 2016 yang merupakan produsen profesional bahan biomagnetik dan reagen ekstraksi asam nukleat.

Kami memiliki pengalaman yang kaya dalam ekstraksi dan pemurnian asam nukleat, pemurnian protein, pemisahan sel, kimialuminesensi, dan bidang teknis lainnya.

Produk kami banyak digunakan di berbagai bidang, misalnya tes kesehatan, pengujian genetik, penelitian universitas, pemuliaan genetik, dan sebagainya. Kami tidak hanya menyediakan produk tetapi juga dapat melakukan OEM, ODM, dan kebutuhan lainnya. Jika Anda memiliki kebutuhan terkait, jangan ragu untuk menghubungi kami .