Entmystifizierung der Nukleinsäure-Agarose-Gelelektrophorese

In molekularbiologischen Experimenten, Überprüfung der Qualität von Nukleinsäuren extrahiert durch Magnetkügelchen-Methode durch Agarosegelelektrophorese (Gel läuft) ist ein entscheidender Schritt. Jedoch, Anfänger stoßen oft auf einige verwirrende Elektrophorese-Phänomene. Welche Informationen stecken hinter diesen abnormalen Phänomenen?? Wie lässt sich das dann verhindern??

1. Bandschwimmen: Eine Warnung vor dem Abbau von Nukleinsäuren

Wenn das Band von oben nach unten einen kontinuierlichen, schlierenartigen Verlauf aufweist, es zeigt normalerweise an, dass die Nukleinsäure abgebaut wurde. Das könnte daran liegen:

1. Abbau der Probe selbst (Versäumnis, es sofort nach der Sammlung zu handhaben oder wiederholtes Einfrieren und Auftauen

2. Während des Operationsprozesses wird eine Nukleasekontamination eingeführt

3. Die Lagerzeit nach dem Knacken ist zu lang

4. Zu hohe mechanische Scherkraft (übermäßig heftiges Blasen und Schlagen)

Vorbeugende Maßnahmen: Verwenden Sie frische Proben; Stellen Sie sicher, dass die Versuchsumgebung sauber und frei von Verschmutzung ist; Der Operationsprozess ist schonend. Nachdem die Extraktion abgeschlossen ist, Testen Sie es umgehend oder lagern Sie es bei -80 °C.

2. Bandunschärfe: Ein Signal, das auf verbleibende Verunreinigungen hinweist

Wenn die Banddiffusion verschwommen ist und die Grenze nicht klar ist, Der häufigste Grund ist:

1. Restliche Salzionen (unvollständiges Waschen

2. Protein- oder Polysaccharid-Kontamination

3. Ethanolrückstände (Beeinträchtigung der elektrophoretischen Mobilität

Vorbeugende Maßnahmen: Stellen Sie sicher, dass die überschüssige Flüssigkeit nach dem letzten Waschgang gründlich aufgesaugt wird. Lassen Sie die Magnetperlen mäßig trocknen (Die Oberfläche sollte matt, aber nicht rissig sein); Für komplexe Proben, die Anzahl der Wäschen kann erhöht werden.

3. Lächelnde Bands: Ungeeignete Elektrophoresebedingungen

Die beiden Enden des Bandes sind in einer Kurve nach oben gebogen “lächeln” Form, was normalerweise mit den Elektrophoresebedingungen zusammenhängt:

1. Zu hohe elektrische Feldstärke (zu hohe Spannung)

2. Ungleichmäßige Gelkühlung

3. Die Ionenstärke des Elektrophoresepuffers ist ungeeignet oder er wurde zu oft wiederverwendet

Vorbeugende Maßnahmen: Reduzieren Sie die Elektrophoresespannung entsprechend; Verwenden Sie frisch zubereiteten Elektrophoresepuffer; Stellen Sie sicher, dass der Elektrophoresetank mit einer geeigneten Kühlvorrichtung ausgestattet ist.

4. Weitere häufig gestellte Fragen

Keine Band: Möglicherweise liegt es am Verlust der Magnetkügelchen, unzureichende Elution oder unzureichende Probengröße

Ungewöhnliche helle Flecken: Möglicherweise handelt es sich um eine RNA-Kontamination (in DNA-Proben) oder genomische DNA-Kontamination (in RNA-Proben)

Professionelle Beratung: Für jedes Experiment sollten Positiv- und Negativkontrollen eingerichtet werden. Dadurch lässt sich schnell feststellen, ob das Problem in der Probe selbst oder im Extraktionsprozess liegt. Gleichzeitig, Denken Sie daran, dass das Auslaufen des Leims nur der erste Schritt bei der Qualitätsprüfung ist. Für nachgelagerte Experimente wie qPCR und Sequenzierung, Für eine präzise Quantifizierung wird die Verwendung von Nanodrop oder Qubit empfohlen.

Wenn Sie die Ursachen und Lösungen dieser häufigen Probleme verstehen, können Sie nicht nur schöne Elektrophoreseergebnisse erzielen, sondern auch der Schlüssel zum Erfolg nachgelagerter Experimente sein. Gute experimentelle Gewohnheiten und sorgfältige technische Abläufe sind die Grundlage für die Gewinnung hochwertiger Nukleinsäureproben.

Anbieter

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.wurde gegründet in 2016 Das ist ein professioneller Hersteller von biomagnetischen Materialien und Nukleinsäure-Extraktionsreagenzien.

Wir verfügen über umfangreiche Erfahrung in der Extraktion und Reinigung von Nukleinsäuren, Proteinreinigung, Zelltrennung, Chemilumineszenz, und anderen technischen Bereichen.

Unsere Produkte werden in vielen Bereichen weit verbreitet eingesetzt, wie zum Beispiel medizinische Tests, Gentests, universitäre Forschung, genetische Zucht, und so weiter. Wir liefern nicht nur Produkte, sondern können auch OEM übernehmen, ODM, und andere Bedürfnisse. Wenn Sie einen entsprechenden Bedarf haben, Nehmen Sie gerne Kontakt zu uns auf .