டிஜிட்டல் PCR இல் பாலிஸ்டிரீன் மைக்ரோஸ்பியர்களின் பயன்பாடு

PCR இன் மூன்றாம் தலைமுறையாக, டிஜிட்டல் பிசிஆர் முழுமையான அளவீட்டின் நன்மைகளைக் கொண்டுள்ளது, குறைந்த மாதிரி தேவை, அதிக உணர்திறன், மற்றும் தடுப்பான்களுக்கு சகிப்புத்தன்மை, மற்றும் மரபணு மாற்றத்தைக் கண்டறிவதில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது, நகல் எண் மாறுபாடு, நோய்க்கிருமி நுண்ணுயிரிகள், மற்றும் மரபணு மாற்றப்பட்ட பயிர்கள். சந்தையில் டிஜிட்டல் பிசிஆர் பொதுவாக டிராப்லெட் டிஜிட்டல் பிசிஆர் ஆகும் (ddPCR) பயோ-ராட் மற்றும் சிப் டிஜிட்டல் பிசிஆர் மூலம் குறிப்பிடப்படுகிறது (cdPCR) தெர்மோ ஃபிஷரால் குறிப்பிடப்படுகிறது; அதாவது, பயோ-ரேட் நீர்-எண்ணெய் வடிவத்தில் மைக்ரோஃப்ளூய்டிக் தொழில்நுட்பத்தின் மூலம் பெருக்க அமைப்பை நானோ அல்லது மைக்ரான் அலகுகளாகப் பிரிக்கிறது., தெர்மோ ஃபிஷர் பெருக்க அமைப்பை மைக்ரோஃப்ளூய்டிக் தொழில்நுட்பத்தின் மூலம் நானோ அல்லது மைக்ரான் அலகுகளாகப் பிரிக்கிறது., மற்றும் தெர்மோ ஃபிஷர் பெருக்க அமைப்பை மைக்ரோஃப்ளூய்டிக் தொழில்நுட்பம் மூலம் நானோ அல்லது மைக்ரான் அலகுகளாக பிரிக்கிறது. மைக்ரோமீட்டர் அலகுகள் மற்றும் தெர்மோ ஃபிஷர் பெருக்க அமைப்பை நானோ/மைக்ரோமீட்டர் அலகுகளாகப் பிரிக்கிறது.. இந்த இரண்டு தொழில்நுட்ப வழிகளும் பயோ-ராட் துளி மைக்ரோஃப்ளூய்டிக்ஸ் மூலம் மிகவும் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, இது சிறியமயமாக்கலின் குறிப்பிடத்தக்க நன்மைகளை வழங்குகிறது, பிராந்தியமயமாக்கல், மற்றும் மைக்ரோஸ்பியர்களை இணைக்கும் திறன் காரணமாக இணையாக்கம், செல்கள், மற்றும் நானோலிட்டர் அல்லது பைகோலிட்டர் மைக்ரோ ரியாக்டர்களில் உள்ள பிற உலைகள்.

எக்ஸோசோம்கள் சப்-மைக்ரான் சவ்வு வெசிகல்ஸ் ஆகும் (30-200 nm) உயிரணுக்களால் சுரக்கப்படுகிறது மற்றும் புரதங்கள் போன்ற முக்கியமான தகவல்களைக் கொண்டுள்ளது, சிறிய ஆர்.என்.ஏ, மற்றும் டிஎன்ஏ, நோய் கண்டறிதல் மற்றும் முன்கணிப்பு சோதனைக்கான மருத்துவ திரவ பயாப்ஸிகளுடன் நெருங்கிய தொடர்புடையவை. எனினும், அவற்றின் சிறிய அளவு அதிக செயல்திறன் மற்றும் தூய்மையுடன் சிக்கலான உடல் திரவங்களிலிருந்து எக்சோசோம்களை தனிமைப்படுத்த பெரும் சவாலாக உள்ளது.. பின்னிங் ஸௌ மற்றும் பலர். உயிர் இணக்கமான பாலிமர்களைச் சேர்த்து ஒரு விஸ்கோலாஸ்டிக் திரவத்தைப் பயன்படுத்தி ஒரு தலைகீழ் அலை சேனல் கட்டமைப்பை முன்மொழிந்தார் [2] சப்மிக்ரான் துகள்கள் மற்றும் எக்சோசோம்களின் மீள் நிலைத்தன்மை கவனம் செலுத்துதல் மற்றும் வரிசைப்படுத்துதல். திரும்பத் திரும்ப அலை சேனல் அமைப்பு மைக்ரோஃப்ளூய்டின் ஒரு குறிப்பிட்ட கால இடைவெளியில் டீன் இரண்டாம் நிலை ஓட்டத்தை உருவாக்குகிறது.. ஃப்ளோரசன்ட் சப்மிக்ரான் கோளங்களின் நான்கு வெவ்வேறு அளவுகளைப் பயன்படுத்துதல் (1 µm, 500 nm, 300, மற்றும் 100 nm) வெவ்வேறு நிலைமைகளின் கீழ் கவனம் செலுத்தும் நடத்தையைப் படிக்க, அவர்கள் எளிமையாக சாதித்தனர், உயர்-செயல்திறன், எக்ஸோசோம்களின் லேபிள்-இல்லாத வரிசைப்படுத்தல், தூய்மையை விட அதிகமானது 92% மற்றும் மீட்டெடுப்பதை விட அதிகமாக உள்ளது 81%. இந்த வளர்ந்த மீள் நிலைத்தன்மை எக்சோசோம் வரிசையாக்க நுட்பம் பல்வேறு எக்சோசோம் தொடர்பான உயிரியல் ஆய்வுகள் மற்றும் மருந்து பயன்பாடுகளுக்கு ஒரு நம்பிக்கைக்குரிய தளத்தை வழங்கலாம்..

இந்த பயன்பாடுகளின் பெரும் திறன் இருந்தபோதிலும், மைக்ரோஸ்பியர்ஸ்/செல்களின் அடைப்பு முற்றிலும் சீரற்றதாக உள்ளது, மற்றும் பாய்சன் விநியோகத்தால் கட்டுப்படுத்தப்பட்டது. ஒரு துளியானது ஒரு மைக்ரோஸ்பியரை இணைக்கும் நிகழ்தகவு கோட்பாட்டளவில் அதிகமாக இல்லை 37%, அதிக எண்ணிக்கையிலான மைக்ரோஸ்பியர்ஸ் மற்றும் நீர்த்துளி பகிர்வுகளை வீணாக்குகிறது, இதன் விளைவாக குறைந்த கண்டறிதல் செயல்திறன் ஏற்படுகிறது. மைக்ரோஸ்பியர்ஸ் அல்லது அரிய செல்களின் பயன்பாட்டை மேம்படுத்த, பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் முறைகள் பொதுவாக ஒரு தத்துவார்த்த சராசரியைப் பயன்படுத்துகின்றன (λT) < 0.1 பயன்படுத்தப்படும் மைக்ரோஸ்பியர்களின் செறிவைத் தீர்மானிக்க ஒரு துளிக்கு மைக்ரோஸ்பியர்ஸ்/செல்கள், இது தனிப்பட்ட மைக்ரோஸ்பியர்களின் மிகக் குறைந்த உறைவு விகிதத்தில் விளைகிறது, பொதுவாக கீழே 10%. நீர்த்துளி அமைப்பில் உள்ள எண்ணற்ற துளிகளால் பயனடைதல், பாய்சன் விநியோகமானது மாதிரி நுகர்வு மற்றும் கணக்கிடப்பட வேண்டிய நுண்ணுயிரிகள்/செல்களின் எண்ணிக்கை சிறியதாக இருக்கும் போது மதிப்பிடும் நேரத்தின் மீது குறைவான தாக்கத்தை ஏற்படுத்துகிறது..

ஒற்றை செல்கள் அல்லது பாலிஸ்டிரீன் மைக்ரோஸ்பியர்களின் துளி உறைவு டிஜிட்டல் மதிப்பீடுகள் போன்ற பகுதிகளில் பரவலான பயன்பாடுகளைக் கொண்டுள்ளது., ஒற்றை செல் வரிசைமுறை, மற்றும் மருந்து பரிசோதனை. எனினும், நுண்ணுயிரிகளின் உறைவு பாய்சன் விநியோகக் கட்டுப்பாடுகளால் முற்றிலும் சீரற்றதாக உள்ளது, மற்றும் ஒற்றை நுண்ணுயிர் இணைப்பின் கோட்பாட்டு நிகழ்தகவு பொதுவாக மட்டுமே இருக்கும் 10%. அல்ட்ரா-ஹை-மல்டிபிளெக்ஸ்டு டிஜிட்டலைஸ் கண்டறிதல் அல்லது அதிக எண்ணிக்கையிலான மைக்ரோஸ்பியர்களை அளவிட வேண்டிய பிற பயன்பாடுகளில், கணக்கிடப்பட வேண்டிய பகிர்வுகளின் எண்ணிக்கை மிக அதிகமாக உள்ளது, தவறான நீர்த்துளிகளின் எண்ணிக்கை மற்றும் கண்டறிதல் தரவுகளின் பணிநீக்கத்தின் எண்ணிக்கையில் பெரிய அதிகரிப்புக்கு வழிவகுக்கிறது. இந்த காரணத்திற்காக, Xiaoyu Yue ஒரு பீட் ஆர்டர் செய்யப்பட்ட ஏற்பாடு துளியை வடிவமைத்தார் (படகு) பாய்சன் விநியோகத்தின் வரம்புகளை உடைப்பதற்கான ஒரு வழியாக அமைப்பு [1].

The BOAD system cleverly combines sheath flow, Dean vortex, and compression flow channel to realize the first-ever ordered arrangement of microspheres and enables the fastest ordered arrangement of microspheres in the shortest structure, with single-bead encapsulation efficiency up to about 86%. Further applications to encapsulate coded microspheres and IL-10-targeted magnetic polystyrene microspheres have fully demonstrated the potential of microsphere-based ultra-high-multiplexed digital detection. As a result, the BOAD system is very promising for many applications that require high single-particle encapsulation rates within limited compartments, such as ultra-high-multiplexed digital bioassays, single-cell analysis, drug screening, and single exosome detection.

In all applications, droplet-based encapsulation of particles (cells and microspheres) is an ideal platform for single-cell analysis of cellular reprogramming, drug discovery, and secretion detection due to its uniformly small reactor diameters, unique microscale flow phenomena, and unlimited number of isolation units, and also allows for bead-based ultrasensitive digital detection of low-abundance proteins, exosomes, and other biomolecules.

Reference：

[1] Yue, X., Fang, X., Sun, T., Yi, J., Kuang, X., Guo, Q., Wang, Y., Gu, எச். and Xu, எச். 2022. Breaking through the Poisson Distribution: A compact high-efficiency droplet microfluidic system for single-bead encapsulation and digital immunoassay detection. Biosensors and Bioelectronics. 211, (Sep. 2022), 114384. DOI:https://doi.org/10.1016/j.bios.2022.114384.

[2] Zhou, Y., Ma, Z., Tayebi, எம். and Ai, ஒய். 2019. Submicron Particle Focusing and Exosome Sorting by Wavy Microchannel Structures within Viscoelastic Fluids. Analytical Chemistry. 91, 7 (Apr. 2019), 4577–4584. DOI:https://doi.org/10.1021/acs.analchem.8b05749.

சப்ளையர்

ஷாங்காய் லிங்ஜுன் பயோடெக்னாலஜி கோ., லிமிடெட்இல் நிறுவப்பட்டது 2016 உயிர் காந்த பொருட்கள் மற்றும் நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் உலைகளின் தொழில்முறை உற்பத்தியாளர்.

நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் சுத்திகரிப்பு ஆகியவற்றில் எங்களுக்கு சிறந்த அனுபவம் உள்ளது, புரத சுத்திகரிப்பு, செல் பிரிப்பு, இரசாயன ஒளிர்வு, மற்றும் பிற தொழில்நுட்ப துறைகள்.

எங்கள் தயாரிப்புகள் பல துறைகளில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, மருத்துவ பரிசோதனை போன்றவை, மரபணு சோதனை, பல்கலைக்கழக ஆராய்ச்சி, மரபணு இனப்பெருக்கம், மற்றும் பல. நாங்கள் தயாரிப்புகளை வழங்குவது மட்டுமல்லாமல் OEM ஐயும் மேற்கொள்ள முடியும், ODM, மற்றும் பிற தேவைகள். உங்களுக்கு தொடர்புடைய தேவை இருந்தால், தயவு செய்து எங்களை தொடர்பு கொள்ளவும்sales01@lingjunbio.com.