आपके आरएनए एकाग्रता को अधिकतम करने के लिए अंतिम गाइड

परिचय

की बढ़ती आरएनए एकाग्रता आणविक जीव विज्ञान प्रयोगों में एक बहुत ही सामान्य आवश्यकता है. निम्नलिखित दो बिंदु महत्वपूर्ण हैं.

1. प्रारंभिक सामग्री का चयन और प्रसंस्करण

1.1 आरंभिक सामग्री की मात्रा बढ़ाएँ:

यह सबसे सीधा तरीका है. लाइसिस बफर की स्वीकार्य क्षमता के भीतर अधिक ऊतक या कोशिकाओं का उपयोग करें. उदाहरण के लिए, यदि किट 10-50 मिलीग्राम ऊतक की अनुशंसा करती है, आप की ऊपरी सीमा का उपयोग करने का प्रयास कर सकते हैं 50 मिलीग्राम या उससे भी थोड़ा अधिक (यह सुनिश्चित करना कि लाइसिस बफ़र पूरी तरह से सामग्री को कवर और लाइज़ करता है).

1.2 उच्च आरएनए अभिव्यक्ति वाली सामग्रियों का चयन करें:

यदि प्रयोग अनुमति देता है, ऐसे ऊतकों या कोशिकाओं को चुनें जो साइटोप्लाज्म से समृद्ध हों और चयापचय रूप से सक्रिय हों, क्योंकि उनमें स्वाभाविक रूप से उच्च आरएनए स्तर होते हैं.

1.3 नमूने को कुशलतापूर्वक बाधित करें:

• ऊतक: लिसीस बफर डालने से पहले इसे तरल नाइट्रोजन में तब तक अच्छी तरह पीसें जब तक यह एक महीन पाउडर न बन जाए. वैकल्पिक, पूर्ण समरूपीकरण के लिए एक ऊतक समरूपीकरण का उपयोग करें. अकुशल व्यवधान कम उपज का एक मुख्य कारण है.
• प्रकोष्ठों: सुनिश्चित करें कि लिसीस बफर कोशिकाओं के साथ पूर्ण और तेजी से संपर्क बनाता है. अनुगामी कोशिकाओं के लिए, लाइसिस बफर को सीधे कल्चर डिश में और पिपेट को लाइसे में जोड़ें.

2. निष्कर्षण प्रक्रिया का अनुकूलन

चुंबकीय मनका-आधारित आरएनए निष्कर्षण: आसानी से उच्च-सांद्रण आरएनए कैसे प्राप्त करें और इसे आगे कैसे केंद्रित करें

चुंबकीय मनका-आधारित निष्कर्षण के साथ उच्च आरएनए एकाग्रता प्राप्त करने की कुंजी बाइंडिंग को अधिकतम करना और निक्षालन मात्रा को कम करना है.

निष्कर्षण के दौरान एकाग्रता बढ़ाने के उपाय:

• पतला किए बिना नमूना इनपुट बढ़ाएँ: मूलरूप में, लाइसिस बफ़र की क्षमता के भीतर अधिक ऊतक या कोशिकाओं का उपयोग करें.
• बाइंडिंग को अनुकूलित करें: पूर्ण लाइसिस के लिए नमूने के साथ लाइसिस बफर का पूरी तरह से मिश्रण सुनिश्चित करें. चुंबकीय मोती जोड़ने के बाद, पर्याप्त ऊष्मायन समय की अनुमति दें (जैसे, 10 कमरे के तापमान पर मिनट) आरएनए को मोतियों से पूरी तरह से जुड़ने के लिए.
• महत्वपूर्ण कदम: क्षालन की मात्रा कम करें! यह सबसे सीधा और प्रभावी तरीका है. इसके बजाय अधिकतम अनुशंसित निक्षालन मात्रा का उपयोग करें (जैसे, 50 μL), के साथ प्रशंसा करने का प्रयास करें 20 μL या यहां तक ​​कि 15 RNase मुक्त पानी का μL. इलूशन बफर को पहले से 55-65 डिग्री सेल्सियस तक गर्म करने और इसे 2-5 मिनट के लिए इनक्यूबेट करने देने से इलुशन दक्षता में काफी सुधार हो सकता है।.

3.निष्कर्ष

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