La guida definitiva per massimizzare la concentrazione di RNA

Introduzione

In aumento Concentrazione di RNA è un requisito molto comune negli esperimenti di biologia molecolare. I due punti seguenti sono cruciali.

1. Selezione e lavorazione del materiale di partenza

1.1 Aumentare la quantità di materiale iniziale:

Questo è l'approccio più semplice. Utilizzare più tessuto o cellule entro la capacità consentita del tampone di lisi. Per esempio, se il kit consiglia 10–50 mg di tessuto, puoi provare a utilizzare il limite superiore di 50 mg o anche leggermente di più (garantire che il tampone di lisi copra e lisi completamente il materiale).

1.2 Selezionare materiali con elevata espressione di RNA:

Se l'esperimento lo consente, scegliere tessuti o cellule ricchi di citoplasma e metabolicamente attivi, poiché contengono naturalmente livelli di RNA più elevati.

1.3 Interrompere in modo efficiente il campione:

• Tessuto: Macinare accuratamente in azoto liquido finché non diventa una polvere fine prima di aggiungere il tampone di lisi. In alternativa, utilizzare un omogeneizzatore tissutale per un'omogeneizzazione completa. L’interruzione inefficiente è uno dei motivi principali del basso rendimento.
• Celle: Assicurarsi che il tampone di lisi entri in contatto completo e rapido con le cellule. Per cellule aderenti, aggiungere direttamente il tampone di lisi alla piastra di coltura e pipettare per lisare.

2. Ottimizzazione del processo di estrazione

Estrazione dell'RNA basata su perline magnetiche: Come ottenere facilmente RNA ad alta concentrazione e concentrarlo ulteriormente

La chiave per ottenere un'elevata concentrazione di RNA con l'estrazione basata su sfere magnetiche è massimizzare il legame e ridurre al minimo il volume di eluizione.

Passaggi per aumentare la concentrazione durante l'estrazione:

• Aumentare l'ingresso del campione senza diluire: Fondamentalmente, utilizzare più tessuti o cellule entro la capacità del tampone di lisi.
• Ottimizza la rilegatura: Garantire un'accurata miscelazione del tampone di lisi con il campione per una lisi completa. Dopo aver aggiunto le perline magnetiche, consentire un tempo di incubazione sufficiente (per esempio., 10 minuti a temperatura ambiente) affinché l'RNA si leghi completamente alle sfere.
• Passaggio critico: Ridurre il volume di eluizione! Questo è il metodo più diretto ed efficace. Invece di utilizzare il volume di eluizione massimo raccomandato (per esempio., 50 μL), prova a eluire con 20 μL o addirittura 15 μL di acqua priva di RNasi. Preriscaldare il tampone di eluizione a 55–65°C e lasciarlo incubare per 2–5 minuti può migliorare significativamente l'efficienza di eluizione.

3.Conclusione

Per risultati ottimali, prendere in considerazione l'utilizzo di reagenti di estrazione a base di perline magnetiche della Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd. L'azienda vanta oltre un decennio di esperienza dedicata nella tecnologia di estrazione basata su sfere magnetiche ed è specializzata nella ricerca sulle sfere magnetiche.

Fornitore

Shanghai Lingjun Biotecnologia Co., Ltd.è stato fondato nel 2016 che è un produttore professionale di materiali biomagnetici e reagenti per l'estrazione degli acidi nucleici.

Abbiamo una ricca esperienza nell'estrazione e purificazione degli acidi nucleici, purificazione delle proteine, separazione cellulare, chemiluminescenza, e altri campi tecnici.

I nostri prodotti sono ampiamente utilizzati in molti campi, come i test medici, test genetici, ricerca universitaria, allevamento genetico, e così via. Non solo forniamo prodotti, ma possiamo anche intraprendere l'OEM, ODM, e altre esigenze. Se hai un'esigenza correlata, non esitate a contattarci .