Den ultimative guide til at maksimere din RNA-koncentration

Indledning

Stigende RNA koncentration er et meget almindeligt krav i molekylærbiologiske eksperimenter. De følgende to punkter er afgørende.

1. Udvælgelse og forarbejdning af udgangsmateriale

1.1 Forøg mængden af ​​udgangsmateriale:

Dette er den mest ligetil tilgang. Brug mere væv eller celler inden for lyseringsbufferens tilladte kapacitet. F.eks, hvis sættet anbefaler 10-50 mg væv, du kan prøve at bruge den øvre grænse for 50 mg eller endda lidt mere (sikre, at lyseringsbufferen dækker og lyserer materialet fuldstændigt).

1.2 Vælg materialer med høj RNA-ekspression:

Hvis eksperimentet tillader det, vælge væv eller celler, der er rige på cytoplasma og metabolisk aktive, da de naturligt indeholder højere RNA-niveauer.

1.3 Afbryde prøven effektivt:

• Væv: Kværn grundigt i flydende nitrogen, indtil det bliver et fint pulver, før lyseringsbufferen tilsættes. Alternativt, brug en vævshomogenisator til fuldstændig homogenisering. Ineffektiv disruption er en af ​​hovedårsagerne til lavt udbytte.
• Celler: Sørg for, at lysisbufferen kommer i fuld og hurtig kontakt med cellerne. Til klæbende celler, tilsæt lysisbufferen direkte til dyrkningsskålen og pipetter for at lysere.

2. Optimering af udvindingsprocessen

Magnetisk perle-baseret RNA-ekstraktion: Sådan opnår du nemt RNA med høj koncentration og koncentrerer det yderligere

Nøglen til at opnå høj RNA-koncentration med magnetisk perlebaseret ekstraktion er at maksimere binding og minimere elueringsvolumen.

Trin til at øge koncentrationen under ekstraktion:

• Øg prøveinput uden at fortynde: Grundlæggende, bruge mere væv eller celler inden for lysisbufferens kapacitet.
• Optimer binding: Sørg for grundig blanding af lyseringsbufferen med prøven for fuldstændig lysering. Efter tilføjelse af magnetiske perler, tillade tilstrækkelig inkubationstid (f.eks., 10 minutter ved stuetemperatur) for RNA at binde sig fuldstændigt til perlerne.
• Kritisk skridt: Reducer elueringsvolumen! Dette er den mest direkte og effektive metode. I stedet for at bruge den maksimalt anbefalede elueringsvolumen (f.eks., 50 μL), prøv at eluere med 20 μL eller endda 15 μL RNase-frit vand. Forvarmning af elueringsbufferen til 55-65°C og lad den inkubere i 2-5 minutter kan forbedre elueringseffektiviteten markant.

3.Konklusion

For optimale resultater, overvej at bruge magnetiske perle-baserede ekstraktionsreagenser fra Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd. Virksomheden har over et årti med dedikeret erfaring i magnetisk perle-baseret ekstraktionsteknologi og er specialiseret i magnetisk perleforskning.

Leverandør

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.blev etableret i 2016 som er en professionel producent af biomagnetiske materialer og nukleinsyreekstraktionsreagenser.

Vi har stor erfaring med udvinding og oprensning af nukleinsyre, proteinoprensning, celleadskillelse, kemiluminescens, og andre tekniske områder.

Vores produkter er meget udbredt inden for mange områder, såsom medicinsk test, genetisk testning, universitetsforskning, genetisk avl, og så videre. Vi leverer ikke kun produkter, men kan også påtage os OEM, ODM, og andre behov. Hvis du har et relateret behov, er du velkommen til at kontakte os .