استكشاف قابلية تطبيق LnjnBio 22 سلسلة تجزئة الخرزة المغناطيسية في التنقية

اختيار حجم القطعة تعتبر خطوة تأسيسية حاسمة في تجارب البيولوجيا الجزيئية مثل إعداد مكتبة تسلسل الحمض النووي والاستنساخ.

والغرض الأساسي منه هو عزل أجزاء الحمض النووي ضمن نطاق حجم معين من خليط من الأجزاء ذات أطوال مختلفة, تمكين التطبيقات المصب.

مبدأها يعتمد في المقام الأول على الاختلافات في المادية, كيميائية, أو الخواص الكهربائية بين جزيئات الحمض النووي ذات الأحجام المختلفة, الاستفادة من هذه الفروق لتحقيق الفصل والفحص.

تنقية الخرزة المغناطيسية (التثبيت العكسي للمرحلة الصلبة, سبري) حاليا الطريقة الأكثر استخداما وكفاءة, وخاصة في التسلسل عالي الإنتاجية (خ ع) إعداد المكتبة.

مبدأ:

بناءً على العلاقة بين حجم جزء الحمض النووي وكفاءة ربط الخرزة المغناطيسية.

ملزم:

أضف تركيزًا محددًا من البولي إيثيلين جلايكول (ربط) والملح (كلوريد الصوديوم) إلى حل جزء الحمض النووي, ثم قم بإدخال الخرز المغناطيسي المعدل على السطح. في بيئة عالية الملوحة, يجفف الحمض النووي ويكشف العمود الفقري للفوسفات, يتم امتصاصه بشكل عكسي على سطح الخرزة عبر التفاعلات الكارهة للماء والكهروستاتيكية. النقطة الأساسية هي أن أجزاء الحمض النووي الأكبر حجمًا ترتبط بسهولة أكبر وفي وقت أبكر من الأجزاء الأصغر.

هطول الأمطار والانفصال:

ضع أنبوب التفاعل على حامل مغناطيسي. الخرز المغناطيسي (جنبا إلى جنب مع الحمض النووي المرتبط) سوف تلتصق بجدار الأنبوب, ترك المحلول غير المنضم وشظايا الحمض النووي الصغيرة في الطاف.

لشظايا كبيرة:

أضف تركيزًا أقل من محلول PEG/الملح. فقط أجزاء الحمض النووي الكبيرة سوف ترتبط بالخرز المغناطيسي. تجاهل طاف (تحتوي على أجزاء قصيرة غير مرغوب فيها), الاحتفاظ بالخرز المغناطيسي, وأزل الحمض النووي للحصول على شظايا طويلة.

لشظايا قصيرة:

قم أولاً بإضافة محلول PEG/ملح متوسط ​​التركيز لربط معظم الحمض النووي (بما في ذلك الأجزاء الطويلة والقصيرة) إلى الخرز المغناطيسي. تجاهل طاف, والتي سوف تكون خالية تماما من الحمض النووي. التالي, إضافة PEG/المخزن المؤقت أو محلول الماء منخفض التركيز. سوف تنفصل شظايا الحمض النووي القصيرة بشكل تفضيلي عن الخرز المغناطيسي. ضع الخليط مرة أخرى على الحامل المغناطيسي. "الماصة؛" قبالة طاف يحتوي على الأجزاء الصغيرة المستهدفة, التخلص من الأجزاء الكبيرة التي لا تزال مرتبطة بالخرز.

التحقيق التجريبي:

لقد اخترنا العلامة التجارية الأجنبية والخرز المغناطيسي (10 ملغم/مل) وشركتنا R&منتجات د: 220011 (50 ملغم/مل), 220012 (25 ملغم/مل), 220021 (50 ملغم/مل), و 220022 (25 ملغم/مل) (طاولة 1). تم توحيد محتواها الصلب وفقًا لـ 1.2 ملغم/مل تحت تركيزات ملح محددة ونسب PEG. باتباع خطوات التنقية لاختيار الجزء, تم إجراء الجولة الأولى من تنقية 0.6X, تليها الجولة الثانية من تنقية 0.2X على المادة طافية من الجولة الأولى. وتظهر النتائج في الشكل 1.

طاولة 1: تم اختيار الخرز المغناطيسي لتجربة اختيار الجزء

لا.	1	2	3	4	5	6
الخرز	أ	220011	220012	220021	220022	220022'

ملحوظة: 220022′ هي دفعة أخرى من الخرز المغناطيسي

وتظهر النتائج أنه في الجولة الأولى من تنقية 0.6X, الخرز الأجنبي, 220011, 220021, 220022 و 220022′ تم فرزها فوق 500 نقطة أساس, بينما 220012 تم فرزها حتى 400 نقطة أساس; من الجولة الثانية من الفصل 0.2X, الخرز الأجنبي, 220021, 220022 و 220022′ تم فرزها بشكل رئيسي 300-500bp, من بينها 220011 كان به بقايا قليلة بسبب الجزء الكبير ويحتاج إلى مزيد من التحسين, بينما 220012 هناك حاجة إلى مزيد من التحسين بسبب حساسية 220011 إلى الرقم الهيدروجيني. الفرز الرئيسي 300-500bp, منها 220011 لديه بقايا صغيرة بسبب العصابات الكبيرة, ربما بسبب 220011 أكثر حساسية لدرجة الحموضة يحتاج إلى مزيد من التحسين, بينما 220012 نظرًا لأن الجولة الأولى من الاسترداد أعلى، يمكن تعديل تركيز أيونات الملح وPEG بشكل مناسب أو ضبط نسبة حجم الفرز إلى 0.55X + 0.2X لتحقيق نفس تأثير الفرز.

من الدراسة أعلاه, يمكننا أن نرى أن لدينا 220011, 220012, 220021 و 220022 لديها إمكانات كبيرة لتحل محل الخرز المغناطيسي الأجنبي.

تتميز تنقية الخرزة المغناطيسية بمزايا الإنتاجية العالية, الأتمتة, السرعة وعدم وجود الكواشف السامة (مثل الإيثانول), لذلك يمكن استخدامه على نطاق واسع في تنقية مكتبة NGS, تنقية منتج PCR, فرز [كدنا] وما إلى ذلك.

نحن نفهم أن استنساخ البحث العلمي يعتمد على الاستقرار العالي للكواشف. تخضع كل دفعة من الخرز المغناطيسي لرقابة صارمة على الجودة لضمان أن تكون الجزيئات موحدة والأداء مستقر, مما يضمن أنه يمكنك الحصول على نتائج متسقة وموثوقة لكل تجربة. يتم استخدام منتجاتنا على نطاق واسع في سيناريوهات البيولوجيا الجزيئية المختلفة مثل بناء مكتبة NGS, تنقية منتج الهضم, فرز أجزاء الحمض النووي, تنقية [كدنا], إلخ. لا غنى عنها “جميع النواحي” في المختبر الخاص بك.

مزود

شركة شنغهاي لينغجون للتكنولوجيا الحيوية, المحدودة.تأسست في 2016 وهي شركة متخصصة في تصنيع المواد المغناطيسية الحيوية وكواشف استخلاص الحمض النووي.

لدينا خبرة غنية في استخراج وتنقية الحمض النووي, تنقية البروتين, فصل الخلايا, التألق الكيميائي, وغيرها من المجالات التقنية.

منتجاتنا تستخدم على نطاق واسع في العديد من المجالات, مثل الفحوصات الطبية, الاختبارات الجينية, البحوث الجامعية, التكاثر الوراثي, وهكذا. نحن لا نقدم المنتجات فحسب، بل يمكننا أيضًا إجراء تصنيع المعدات الأصلية, أوديإم, وغيرها من الاحتياجات. إذا كان لديك حاجة ذات صلة, لا تتردد في الاتصال بنا .