LnjnBio의 적용 가능성 탐구 22 정제의 시리즈 자기 비드 분할

조각 크기 선택 DNA 염기서열 분석 라이브러리 준비 및 클로닝과 같은 분자생물학 실험에서 중요한 기본 단계입니다..

핵심 목적은 다양한 길이의 단편 혼합물로부터 특정 크기 범위 내의 DNA 단편을 분리하는 것입니다., 다운스트림 애플리케이션 활성화.

그 원리는 주로 물리적 차이에 의존합니다., 화학적인, 또는 다양한 크기의 DNA 분자 사이의 전기적 특성, 이러한 구별을 활용하여 분리 및 선별을 달성합니다..

자기 비드 정제 (고체상 가역적 고정화, SPRI) 현재 가장 널리 사용되고 효율적인 방법이다., 특히 처리량이 많은 시퀀싱에서 (NGS) 도서관 준비.

원칙:

DNA 조각 크기와 자기 비드 결합 효율 간의 관계를 기반으로 합니다..

제본:

특정 농도의 폴리에틸렌 글리콜을 추가합니다. (못) 그리고 소금 (NaCl) DNA 단편 용액에, 그런 다음 표면 수정된 자기 비드를 도입합니다.. 고염분 환경에서, DNA는 탈수되어 인산염 골격을 노출시킵니다., 소수성 및 정전기적 상호작용을 통해 비드 표면에 가역적으로 흡착. 중요한 점은 큰 DNA 조각이 작은 조각보다 더 쉽게 그리고 더 빨리 결합한다는 것입니다..

침전 및 분리:

반응 튜브를 자기 스탠드에 놓습니다.. 자기구슬 (결합된 DNA와 함께) 튜브 벽에 달라붙을 것입니다., 상청액에 결합되지 않은 용액과 작은 DNA 조각을 남깁니다..

큰 조각의 경우:

더 낮은 농도의 PEG/소금 용액을 추가하세요.. 큰 DNA 조각만 자기 비드에 결합됩니다.. 상층액을 버리세요 (원하지 않는 짧은 조각이 포함된 경우), 자석 구슬을 유지, DNA를 용출하여 긴 단편을 얻습니다..

짧은 조각의 경우:

First add a medium-concentration PEG/salt solution to bind most DNA (including both long and short fragments) to the magnetic beads. 상층액을 버리세요, which will be completely devoid of DNA. 다음, add a low-concentration PEG/buffer or water solution. Short DNA fragments will preferentially dissociate from the magnetic beads. Place the mixture back on the magnetic stand. Pipette off the supernatant containing the target small fragments, discarding the large fragments still bound to the beads.

Experimental Investigation:

We selected foreign brand A magnetic beads (10 mg/ml) and our company’s R&D products: 220011 (50 mg/ml), 220012 (25 mg/ml), 220021 (50 mg/ml), 그리고 220022 (25 mg/ml) (테이블 1). Their solid content was standardized to 1.2 mg/ml under specific salt concentrations and PEG percentages. Following the purification steps for fragment selection, a first round of 0.6X purification was performed, 그 다음 첫 번째 라운드의 상청액에 대한 0.2X 정제의 두 번째 라운드가 이어졌습니다.. 결과는 그림에 나와 있습니다. 1.

테이블 1: 단편 선택 실험을 위해 선택된 자기 비드

아니요.	1	2	3	4	5	6
염주	에이	220011	220012	220021	220022	220022’

메모: 220022′ 또 다른 자기 구슬 배치입니다.

결과는 0.6X 정제의 첫 번째 라운드에서, 외국 A 비즈, 220011, 220021, 220022 그리고 220022′ 500bp 이상으로 정렬되었습니다., ~하는 동안 220012 400bp까지 정렬되었습니다.; 0.2X 분리 2차부터, 외국 A 비즈, 220021, 220022 그리고 220022′ 주로 300-500bp로 분류되었습니다., 그 중 220011 큰 조각으로 인해 약간의 잔여물이 있었고 추가 최적화가 필요했습니다., ~하는 동안 220012 민감도 때문에 추가 최적화가 필요함 220011 pH로. 주요 분류 300-500bp, 그 중 220011 큰 밴드로 인해 약간의 잔여물이 있음, 아마도 때문에 220011 pH에 더 민감하므로 더욱 최적화해야 합니다., ~하는 동안 220012 첫 번째 라운드의 회수율이 높기 때문에 염 이온과 PEG의 농도를 적절하게 조정하거나 분류 부피 비율을 0.55X로 조정할 수 있습니다. + 0.2동일한 정렬 효과를 얻으려면 X를 사용하세요..

위의 연구에서, 우리는 우리의 것을 볼 수 있습니다 220011, 220012, 220021 그리고 220022 외국 자기 비드를 대체할 수 있는 잠재력이 크다.

자기 비드 정제는 처리량이 높다는 장점이 있습니다., 오토메이션, 신속하고 독성 시약이 없음 (에탄올과 같은), NGS 라이브러리 정제에 널리 사용될 수 있습니다., PCR 산물 정제, cDNA 정렬 등.

우리는 과학 연구의 재현성이 시약의 높은 안정성에 달려 있다는 것을 알고 있습니다.. 자성 비드의 각 배치는 입자가 균일하고 성능이 안정적인지 확인하기 위해 엄격한 품질 관리를 거칩니다., 이를 통해 모든 실험에 대해 일관되고 신뢰할 수 있는 결과를 얻을 수 있습니다.. 당사의 제품은 NGS 라이브러리 구축과 같은 다양한 분자생물학 시나리오에서 널리 사용됩니다., 소화 생성물 정제, DNA 단편 정렬, cDNA 정제, 등. 그들은 없어서는 안될 존재입니다 “만능인” 당신의 실험실에서.

공급자

상하이 링쥔 생명공학 유한회사, 주식회사에 설립되었습니다 2016 생체자성재료 및 핵산추출시약 전문제조업체입니다..

핵산 추출 및 정제 분야에서 풍부한 경험을 보유하고 있습니다., 단백질 정제, 세포 분리, 화학발광, 및 기타 기술 분야.

우리의 제품은 많은 분야에서 널리 사용됩니다., 의료 테스트와 같은, 유전자 검사, 대학 연구, 유전자 육종, 등. 우리는 제품을 제공할 뿐만 아니라 OEM도 수행할 수 있습니다., ODM, 그리고 다른 필요. 관련된 필요사항이 있는 경우, 저희에게 연락하게 자유롭게 느끼십시오 .