Meneroka Kebolehgunaan LnjnBio 22 Siri Pembahagian Manik Magnet dalam Pemurnian

Pemilihan Saiz Serpihan ialah langkah asas kritikal dalam eksperimen biologi molekul seperti penyediaan perpustakaan penjujukan DNA dan pengklonan.

Tujuan terasnya adalah untuk mengasingkan serpihan DNA dalam julat saiz tertentu daripada campuran serpihan dengan panjang yang berbeza-beza., membolehkan aplikasi hiliran.

Prinsipnya bergantung terutamanya pada perbezaan fizikal, kimia, atau sifat elektrik di antara molekul DNA dengan saiz yang berbeza-beza, memanfaatkan perbezaan ini untuk mencapai pemisahan dan penyaringan.

Pembersihan manik magnetik (Imobilisasi Boleh Balik Fasa Pepejal, SPRI) kini merupakan kaedah yang paling banyak digunakan dan berkesan, terutamanya dalam penjujukan throughput tinggi (NGS) penyediaan perpustakaan.

Prinsip:

Berdasarkan hubungan antara saiz serpihan DNA dan kecekapan mengikat manik magnetik.

Mengikat:

Tambah kepekatan tertentu polietilena glikol (PEG) dan garam (NaCl) kepada larutan serpihan DNA, kemudian memperkenalkan manik magnet yang diubah suai permukaan. Dalam persekitaran garam yang tinggi, DNA mengeringkan dan mendedahkan tulang belakang fosfatnya, menjerap secara terbalik ke permukaan manik melalui interaksi hidrofobik dan elektrostatik. Perkara utama ialah serpihan DNA yang lebih besar mengikat lebih mudah dan lebih awal daripada serpihan yang lebih kecil.

Kerpasan dan Pemisahan:

Letakkan tiub tindak balas pada dirian magnet. Manik magnet (bersama DNA terikat) akan melekat pada dinding tiub, meninggalkan larutan tidak terikat dan serpihan DNA kecil dalam supernatan.

Untuk serpihan besar:

Tambah kepekatan larutan PEG/garam yang lebih rendah. Hanya serpihan DNA yang besar akan mengikat pada manik magnet. Buang supernatan (mengandungi serpihan pendek yang tidak diingini), mengekalkan manik magnet, dan mencairkan DNA untuk mendapatkan serpihan yang panjang.

Untuk serpihan pendek:

Mula-mula tambah larutan PEG/garam kepekatan sederhana untuk mengikat kebanyakan DNA (termasuk serpihan panjang dan pendek) kepada manik magnet. Buang supernatan, yang akan tiada DNA sepenuhnya. Seterusnya, tambahkan larutan PEG/penampan atau air berkepekatan rendah. Serpihan DNA pendek lebih suka berpisah daripada manik magnet. Letakkan semula campuran pada dirian magnet. Pipet dari supernatan yang mengandungi serpihan kecil sasaran, membuang serpihan besar yang masih terikat pada manik.

Penyiasatan Eksperimen:

Kami memilih manik magnet A jenama asing (10 mg/ml) dan R syarikat kami&D produk: 220011 (50 mg/ml), 220012 (25 mg/ml), 220021 (50 mg/ml), dan 220022 (25 mg/ml) (Jadual 1). Kandungan pepejal mereka telah diseragamkan kepada 1.2 mg/ml di bawah kepekatan garam tertentu dan peratusan PEG. Mengikuti langkah penulenan untuk pemilihan serpihan, pusingan pertama penulenan 0.6X telah dilakukan, diikuti dengan pusingan kedua penulenan 0.2X pada supernatan dari pusingan pertama. Keputusan ditunjukkan dalam Rajah 1.

Jadual 1: Manik magnet dipilih untuk eksperimen pemilihan serpihan

Tidak.	1	2	3	4	5	6
manik	A	220011	220012	220021	220022	220022'

Nota: 220022′ adalah satu lagi kumpulan manik magnet

Keputusan menunjukkan bahawa dalam pusingan pertama penulenan 0.6X, manik A asing, 220011, 220021, 220022 dan 220022′ telah diisih melebihi 500bp, sementara 220012 telah diisih sehingga 400bp; daripada pusingan kedua pemisahan 0.2X, manik A asing, 220021, 220022 dan 220022′ kebanyakannya diisih 300-500bp, antaranya 220011 mempunyai sedikit sisa kerana serpihan yang besar dan perlu dioptimumkan lagi, sementara 220012 perlu dioptimumkan lagi kerana sensitiviti 220011 kepada pH. Isihan utama 300-500bp, yang mana 220011 mempunyai sedikit sisa kerana jalur besar, mungkin disebabkan 220011 lebih sensitif kepada pH perlu dioptimumkan lagi, sementara 220012 kerana pusingan pertama pemulihan adalah lebih tinggi boleh disesuaikan dengan sewajarnya kepekatan ion garam dan PEG atau melaraskan nisbah isipadu pengisihan kepada 0.55X + 0.2X untuk mencapai kesan pengisihan yang sama.

Daripada kajian di atas, kita dapat melihat bahawa kita 220011, 220012, 220021 dan 220022 mempunyai potensi besar untuk menggantikan manik magnet asing.

Pembersihan manik magnet mempunyai kelebihan daya pemprosesan yang tinggi, automasi, kepantasan dan tiada reagen toksik (seperti etanol), jadi ia boleh digunakan secara meluas dalam pembersihan perpustakaan NGS, Pemurnian produk PCR, pengisihan cDNA dan sebagainya.

Kami memahami bahawa kebolehulangan penyelidikan saintifik bergantung pada kestabilan tinggi reagen. Setiap kelompok manik magnet menjalani kawalan kualiti yang ketat untuk memastikan zarahnya seragam dan prestasinya stabil, yang memastikan anda boleh memperoleh hasil yang konsisten dan boleh dipercayai untuk setiap percubaan. Produk kami digunakan secara meluas dalam pelbagai senario biologi molekul seperti pembinaan perpustakaan NGS, pembersihan produk pencernaan, Pengisihan serpihan DNA, pembersihan cDNA, dll. Mereka amat diperlukan “serba serbi” dalam makmal anda.

Pembekal

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.ditubuhkan pada 2016 yang merupakan pengilang profesional bahan biomagnet dan reagen pengekstrakan asid nukleik.

Kami mempunyai pengalaman yang kaya dalam pengekstrakan dan penulenan asid nukleik, penulenan protein, pemisahan sel, chemiluminescence, dan bidang teknikal yang lain.

Produk kami digunakan secara meluas dalam pelbagai bidang, seperti ujian perubatan, ujian genetik, penyelidikan universiti, pembiakan genetik, dan seterusnya. Kami bukan sahaja menyediakan produk tetapi juga boleh menjalankan OEM, ODM, dan keperluan lain. Jika anda mempunyai keperluan yang berkaitan, sila hubungi kami .