Explorando la aplicabilidad de LnjnBio 22 Segmentación de perlas magnéticas en serie en purificación

Selección del tamaño del fragmento Es un paso fundamental fundamental en experimentos de biología molecular, como la preparación y clonación de bibliotecas de secuenciación de ADN..

Su objetivo principal es aislar fragmentos de ADN dentro de un rango de tamaño específico a partir de una mezcla de fragmentos de diferentes longitudes., habilitando aplicaciones posteriores.

Su principio se basa principalmente en las diferencias físicas., químico, o propiedades eléctricas entre moléculas de ADN de diferentes tamaños., Aprovechar estas distinciones para lograr la separación y la selección..

Purificación de perlas magnéticas (Inmovilización reversible en fase sólida, SPRI) Es actualmente el método más utilizado y eficiente., particularmente en secuenciación de alto rendimiento (NGS) preparación de la biblioteca.

Principio:

Basado en la relación entre el tamaño del fragmento de ADN y la eficiencia de unión de las perlas magnéticas.

Vinculante:

Agregue una concentración específica de polietilenglicol. (CLAVIJA) y sal (NaCl) a la solución del fragmento de ADN, luego introduzca perlas magnéticas de superficie modificada. En un ambiente rico en sal, El ADN se deshidrata y expone su columna vertebral de fosfato, adsorción reversible a la superficie de la perla a través de interacciones hidrófobas y electrostáticas. El punto clave es que los fragmentos de ADN más grandes se unen más fácilmente y antes que los fragmentos más pequeños..

Precipitación y Separación:

Coloque el tubo de reacción sobre un soporte magnético.. cuentas magnéticas (junto con el ADN unido) se adherirá a la pared del tubo, dejando solución libre y pequeños fragmentos de ADN en el sobrenadante.

Para fragmentos grandes:

Agregue una concentración más baja de PEG/solución salina.. Sólo grandes fragmentos de ADN se unirán a las perlas magnéticas.. Desechar el sobrenadante (que contiene fragmentos cortos no deseados), retener las cuentas magnéticas, y eluir el ADN para obtener fragmentos largos.

Para fragmentos cortos:

Primero agregue una solución de PEG/sal de concentración media para unir la mayor parte del ADN. (incluyendo fragmentos largos y cortos) a las cuentas magnéticas. Desechar el sobrenadante, que estará completamente desprovisto de ADN. Próximo, agregue una solución de PEG/tampón o agua de baja concentración. Los fragmentos cortos de ADN se disociarán preferentemente de las perlas magnéticas.. Vuelva a colocar la mezcla en el soporte magnético.. Pipetear el sobrenadante que contiene los pequeños fragmentos objetivo., desechando los fragmentos grandes aún unidos a las cuentas.

Investigación experimental:

Seleccionamos cuentas magnéticas de marca extranjera A. (10 mg/ml) y la R de nuestra empresa&productos D: 220011 (50 mg/ml), 220012 (25 mg/ml), 220021 (50 mg/ml), y 220022 (25 mg/ml) (Mesa 1). Su contenido sólido fue estandarizado para 1.2 mg/ml bajo concentraciones de sal específicas y porcentajes de PEG. Siguiendo los pasos de purificación para la selección de fragmentos., Se realizó una primera ronda de purificación 0,6X., seguido de una segunda ronda de purificación 0,2X en el sobrenadante de la primera ronda. Los resultados se muestran en la figura. 1.

Mesa 1: Perlas magnéticas seleccionadas para el experimento de selección de fragmentos.

No.	1	2	3	4	5	6
Rosario	A	220011	220012	220021	220022	220022'

Nota: 220022′ es otro lote de cuentas magnéticas

Los resultados muestran que en la primera ronda de purificación 0,6X, las cuentas A extranjeras, 220011, 220021, 220022 y 220022′ se clasificaron por encima de 500 pb, mientras 220012 se clasificó hasta 400 pb; de la segunda ronda de separación 0.2X, las cuentas A extranjeras, 220021, 220022 y 220022′ se clasificaron principalmente entre 300 y 500 pb, entre los cuales 220011 Tenía un pequeño residuo debido al gran fragmento y necesitaba ser optimizado aún más., mientras 220012 necesitaba ser optimizado aún más debido a la sensibilidad de 220011 al pH. clasificación principal 300-500 pb, de los cuales 220011 tiene un poco de residuo debido a las bandas grandes, probablemente debido a 220011 es más sensible al pH debe optimizarse aún más, mientras 220012 Debido a que la primera ronda de recuperación es mayor, se puede ajustar adecuadamente la concentración de iones de sal y PEG o ajustar la relación de volumen de clasificación a 0,55X. + 0.2X para lograr el mismo efecto de clasificación..

Del estudio anterior, podemos ver que nuestro 220011, 220012, 220021 y 220022 Tienen un gran potencial para reemplazar cuentas magnéticas extrañas..

La purificación de perlas magnéticas tiene las ventajas de un alto rendimiento., automatización, Rapidez y sin reactivos tóxicos. (como el etanol), por lo que puede ser ampliamente utilizado en la purificación de bibliotecas NGS, Purificación del producto de PCR, clasificación de ADNc, etc..

Entendemos que la reproducibilidad de la investigación científica depende de la alta estabilidad de los reactivos.. Cada lote de perlas magnéticas se somete a un estricto control de calidad para garantizar que las partículas sean uniformes y el rendimiento sea estable., lo que garantiza que pueda obtener resultados consistentes y confiables para cada experimento. Nuestros productos se utilizan ampliamente en diversos escenarios de biología molecular, como la construcción de bibliotecas NGS., purificación de productos de digestión, clasificación de fragmentos de ADN, purificación de ADNc, etc.. son indispensables “todoterreno” en tu laboratorio.

Proveedor

Shanghai Lingjun Biotecnología Co., Limitado.se estableció en 2016 que es un fabricante profesional de materiales biomagnéticos y reactivos de extracción de ácidos nucleicos..

Tenemos una rica experiencia en extracción y purificación de ácidos nucleicos., purificación de proteínas, separación celular, quimioluminiscencia, y otros campos técnicos.

Nuestros productos son ampliamente utilizados en muchos campos., como pruebas médicas, pruebas genéticas, investigación universitaria, mejoramiento genético, etcétera. No solo proporcionamos productos sino que también podemos realizar OEM, ODM, y otras necesidades. Si tienes una necesidad relacionada, no dude en contactarnos .