LnjnBio की प्रयोज्यता की खोज 22 शुद्धिकरण में श्रृंखला चुंबकीय मनका विभाजन

टुकड़े का आकार चयन डीएनए अनुक्रमण पुस्तकालय तैयारी और क्लोनिंग जैसे आणविक जीवविज्ञान प्रयोगों में एक महत्वपूर्ण मूलभूत कदम है.

इसका मुख्य उद्देश्य अलग-अलग लंबाई के टुकड़ों के मिश्रण से एक विशिष्ट आकार सीमा के भीतर डीएनए टुकड़ों को अलग करना है, डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों को सक्षम करना.

इसका सिद्धांत मुख्यतः भौतिक भिन्नताओं पर निर्भर करता है, रासायनिक, या विभिन्न आकार के डीएनए अणुओं के बीच विद्युत गुण, पृथक्करण और स्क्रीनिंग प्राप्त करने के लिए इन भेदों का लाभ उठाना.

चुंबकीय मनका शुद्धि (ठोस-चरण प्रतिवर्ती स्थिरीकरण, SPRI) यह वर्तमान में सबसे व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली और कुशल विधि है, विशेष रूप से उच्च-थ्रूपुट अनुक्रमण में (एनजीएस) पुस्तकालय की तैयारी.

सिद्धांत:

डीएनए टुकड़े के आकार और चुंबकीय मनका बंधन दक्षता के बीच संबंध पर आधारित.

बाइंडिंग:

पॉलीथीन ग्लाइकोल की एक विशिष्ट सांद्रता जोड़ें (खूंटी) और नमक (सोडियम क्लोराइड) डीएनए खंड समाधान के लिए, फिर सतह-संशोधित चुंबकीय मोतियों का परिचय दें. उच्च नमक वाले वातावरण में, डीएनए निर्जलीकरण करता है और अपनी फॉस्फेट रीढ़ को उजागर करता है, हाइड्रोफोबिक और इलेक्ट्रोस्टैटिक इंटरैक्शन के माध्यम से मनका की सतह पर विपरीत रूप से सोखना. मुख्य बात यह है कि बड़े डीएनए टुकड़े छोटे टुकड़ों की तुलना में अधिक आसानी से और जल्दी जुड़ते हैं.

अवक्षेपण एवं पृथक्करण:

प्रतिक्रिया ट्यूब को चुंबकीय स्टैंड पर रखें. चुंबकीय मोती (बाध्य डीएनए के साथ) ट्यूब की दीवार का पालन करेगा, सतह पर तैरनेवाला में अनबाउंड समाधान और छोटे डीएनए टुकड़े छोड़ना.

बड़े टुकड़ों के लिए:

पीईजी/नमक घोल की कम सांद्रता जोड़ें. केवल बड़े डीएनए टुकड़े ही चुंबकीय मोतियों से बंधेंगे. सतह पर तैरनेवाला त्यागें (जिसमें अवांछित छोटे टुकड़े हों), चुंबकीय मोतियों को बनाए रखें, और लंबे टुकड़े प्राप्त करने के लिए डीएनए को समतल करें.

छोटे टुकड़ों के लिए:

सबसे पहले अधिकांश डीएनए को बांधने के लिए एक मध्यम-सांद्रता पीईजी/नमक समाधान जोड़ें (जिसमें लंबे और छोटे दोनों टुकड़े शामिल हैं) चुंबकीय मोतियों को. सतह पर तैरनेवाला त्यागें, जो पूरी तरह से डीएनए से रहित होगा. अगला, कम सांद्रता वाला पीईजी/बफर या पानी का घोल डालें. छोटे डीएनए टुकड़े अधिमानतः चुंबकीय मोतियों से अलग हो जाएंगे. मिश्रण को वापस चुंबकीय स्टैंड पर रखें. लक्ष्य छोटे टुकड़ों वाले सतह पर तैरनेवाला को पिपेट से हटा दें, मोतियों से अभी भी बंधे हुए बड़े टुकड़ों को हटा दें.

प्रायोगिक जांच:

हमने विदेशी ब्रांड ए के चुंबकीय मोतियों का चयन किया (10 मिलीग्राम/एमएल) और हमारी कंपनी के आर&डी उत्पाद: 220011 (50 मिलीग्राम/एमएल), 220012 (25 मिलीग्राम/एमएल), 220021 (50 मिलीग्राम/एमएल), और 220022 (25 मिलीग्राम/एमएल) (मेज़ 1). उनकी ठोस सामग्री को मानकीकृत किया गया था 1.2 विशिष्ट नमक सांद्रता और पीईजी प्रतिशत के तहत मिलीग्राम/एमएल. टुकड़े के चयन के लिए शुद्धिकरण चरणों का पालन करें, 0.6X शुद्धिकरण का पहला दौर निष्पादित किया गया, पहले दौर से सतह पर तैरनेवाला पर 0.2X शुद्धिकरण के दूसरे दौर के बाद. परिणाम चित्र में दिखाए गए हैं 1.

मेज़ 1: टुकड़ा चयन प्रयोग के लिए चुंबकीय मोतियों का चयन किया गया

नहीं.	1	2	3	4	5	6
मनका	ए	220011	220012	220021	220022	220022'

टिप्पणी: 220022′ चुंबकीय मोतियों का एक और बैच है

नतीजे बताते हैं कि पहले दौर में 0.6X शुद्धिकरण हुआ, विदेशी ए मोती, 220011, 220021, 220022 और 220022′ 500bp से ऊपर क्रमबद्ध किए गए थे, जबकि 220012 400bp तक सॉर्ट किया गया था; 0.2X पृथक्करण के दूसरे दौर से, विदेशी ए मोती, 220021, 220022 और 220022′ मुख्यतः 300-500bp क्रमबद्ध थे, जिसके बीच 220011 बड़े टुकड़े के कारण इसमें थोड़ा अवशेष था और इसे और अधिक अनुकूलित करने की आवश्यकता थी, जबकि 220012 की संवेदनशीलता के कारण इसे और अधिक अनुकूलित करने की आवश्यकता है 220011 पीएच को. इसकी मुख्य सॉर्टिंग 300-500bp है, जिसका कि 220011 बड़े बैंड के कारण इसमें थोड़ा अवशेष है, शायद के कारण 220011 पीएच के प्रति अधिक संवेदनशील है और इसे और अधिक अनुकूलित करने की आवश्यकता है, जबकि 220012 रिकवरी के पहले दौर के कारण नमक आयनों और पीईजी की सांद्रता को उचित रूप से समायोजित किया जा सकता है या सॉर्टिंग वॉल्यूम अनुपात को 0.55X तक समायोजित किया जा सकता है। + 0.2समान सॉर्टिंग प्रभाव प्राप्त करने के लिए X.

उपरोक्त अध्ययन से, हम देख सकते हैं कि हमारा 220011, 220012, 220021 और 220022 विदेशी चुंबकीय मोतियों को बदलने की काफी क्षमता है.

चुंबकीय मनका शुद्धिकरण में उच्च थ्रूपुट के फायदे हैं, स्वचालन, तीव्रता और कोई विषाक्त अभिकर्मक नहीं (जैसे इथेनॉल), इसलिए इसका एनजीएस पुस्तकालय शुद्धिकरण में व्यापक रूप से उपयोग किया जा सकता है, पीसीआर उत्पाद शुद्धि, सीडीएनए छँटाई वगैरह.

हम समझते हैं कि वैज्ञानिक अनुसंधान की प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता अभिकर्मकों की उच्च स्थिरता पर निर्भर करती है. यह सुनिश्चित करने के लिए कि कण एक समान हैं और प्रदर्शन स्थिर है, चुंबकीय मोतियों का प्रत्येक बैच सख्त गुणवत्ता नियंत्रण से गुजरता है, जो सुनिश्चित करता है कि आप प्रत्येक प्रयोग के लिए सुसंगत और विश्वसनीय परिणाम प्राप्त कर सकते हैं. हमारे उत्पादों का व्यापक रूप से एनजीएस पुस्तकालय निर्माण जैसे विभिन्न आणविक जीवविज्ञान परिदृश्यों में उपयोग किया जाता है, पाचन उत्पाद शुद्धि, डीएनए खंड छँटाई, सीडीएनए शुद्धि, वगैरह. वे अपरिहार्य हैं “आल राउंडर” आपकी प्रयोगशाला में.

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शंघाई लिंगजुन बायोटेक्नोलॉजी कंपनी, लिमिटेडमें स्थापित किया गया था 2016 जो बायोमैग्नेटिक सामग्रियों और न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण अभिकर्मकों का एक पेशेवर निर्माता है.

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