PCR அடையாளத்திற்காக டிரான்ஸ்ஜெனிக் அரிசியின் உள் குறிப்பு மரபணுவை எவ்வாறு தேர்ந்தெடுப்பது?

1. குறிப்பு மரபணுக்களுக்கான தேர்வு உத்தி

டிரான்ஸ்ஜெனிக் அரிசி ஆராய்ச்சியில் சோதனை முடிவுகளின் நம்பகத்தன்மையை உறுதி செய்வதற்கு குறிப்பு மரபணுக்களின் அடையாளம் மற்றும் திரையிடல் அடிப்படையாகும்..

2.1தேர்வுக்கான அடிப்படைக் கோட்பாடுகள்

சிறந்த குறிப்பு மரபணுக்கள் வெவ்வேறு திசுக்களில் நிலையான வெளிப்பாட்டை வெளிப்படுத்த வேண்டும், உறுப்புகள், வளர்ச்சி நிலைகள், மற்றும் சோதனை நிலைமைகள். பரவலாக ஏற்றுக்கொள்ளப்பட்ட அளவுகோல் Cq மதிப்பு (அளவீட்டு சுழற்சி) விட குறைவான மாறுபாடு வரம்பு 2.5.

2.2பொது தரவுத்தளங்களைப் பயன்படுத்தி முதற்கட்டத் திரையிடல்

IC4R போன்ற பொது தரவுத்தளங்களைப் பயன்படுத்தவும் (அரிசிக்கான தகவல் பொதுவானது) மற்றும் RiceXRro (அரிசி வெளிப்பாடு சுயவிவர தரவுத்தளம்) ஆரம்ப திரையிடலுக்கு. பயோ இன்ஃபர்மேடிக்ஸ் பகுப்பாய்வு பல்வேறு நிலைமைகளின் கீழ் நிலையான வெளிப்பாட்டுடன் வேட்பாளர் மரபணுக்களை அடையாளம் காண உதவும்.

2.3பாரம்பரிய மற்றும் நாவல் மரபணுக்களின் மதிப்பீடு

(1) பாரம்பரிய மரபணுக்கள்: பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் குறிப்பு மரபணுக்களில் OsSBE4 அடங்கும், RbcS, சட்டம்1, மற்றும் எஸ்.பி.எஸ் (சுக்ரோஸ் பாஸ்பேட் சின்தேஸ் மரபணு).

(2) நாவல் நிலையான மரபணுக்கள்: சில ஆய்வுகள் நிரூபிக்கப்பட்ட நிலைத்தன்மையுடன் புதிய குறிப்பு மரபணுக்களை பரிந்துரைக்கின்றன, UFC1 போன்றவை (UFM1-இணைக்கும் என்சைமின் ஹோமோலாக் 1) மற்றும் FhaB (Adhesin FhaB இன் ஹோமோலாக்), இது குறிப்பிட்ட சூழல்களில் பாரம்பரியமானவற்றை விஞ்சலாம்.

2. பரிசோதனை சரிபார்ப்பு படிகள்

வேட்பாளர் குறிப்பு மரபணுக்களைத் தேர்ந்தெடுத்த பிறகு, சோதனை சரிபார்ப்பு தேவை, இது முதன்மையாக பின்வரும் படிகளை உள்ளடக்கியது:

2.1பரிசோதனை பொருட்கள் தயாரித்தல்

பலவகையான அரிசி மாதிரிகளை சேகரிக்கவும், வெவ்வேறு வகைகளைக் குறிக்கும் (எ.கா., ஜபோனிகா மற்றும் இண்டிகா), திசுக்கள்/உறுப்புகள் (எ.கா., வேர்கள், தண்டுகள், இலைகள், மகரந்தங்கள், விதைகள்), வளர்ச்சி நிலைகள், மற்றும் சிகிச்சை நிலைமைகள் (எ.கா., உயிரியல்/அஜியோடிக் மன அழுத்தம்). பொருந்தினால் குறிப்பிட்ட மரபணுமாற்ற பொருட்களைச் சேர்க்கவும்.

2.2ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் சிடிஎன்ஏ தொகுப்பு

நம்பகமான கருவிகளைப் பயன்படுத்தி உயர்தர மொத்த ஆர்என்ஏவைப் பிரித்தெடுத்து, சிடிஎன்ஏவில் தலைகீழாகப் படியெடுக்கவும். ஆர்என்ஏ தூய்மை மற்றும் ஒருமைப்பாட்டை சரிபார்க்க வேண்டியது அவசியம்.

பயன்படுத்தி ஷாங்காய் LNJNBio ஆலை மொத்த RNA பிரித்தெடுத்தல் கிட்(காந்த மணி முறை) 20mg வெவ்வேறு வகையான தாவர இலைகளை RNA பிரித்தெடுக்கவும்，கீழே காட்டப்பட்டுள்ளபடி முடிவு：

எலக்ட்ரோபெரோகிராம் கீழே காட்டப்பட்டுள்ளது：

2.3 ப்ரைமர் மற்றும் ஆய்வு வடிவமைப்பு

அளவு நிகழ்நேர PCR க்கான ப்ரைமர்கள் மற்றும் ஆய்வுகளை வடிவமைக்கவும் (qPCR) வேட்பாளர் குறிப்பு மரபணுக்களை குறிவைத்தல். முக்கிய பரிசீலனைகள் அடங்கும்:

• மரபணு டிஎன்ஏ பெருக்கத்தைத் தடுக்க ப்ரைமர்கள் எக்ஸான்-எக்ஸான் சந்திப்புகளை பரப்ப வேண்டும்.
• ஆம்ப்ளிகான் நீளம் நன்றாக இருக்க வேண்டும் 80-200 பிபி.
• அதிக விவரக்குறிப்பு தேவைப்படும்போது TaqMan ஆய்வு முறையைப் பயன்படுத்தவும்.

2.4qPCR செயல்படுத்தல் மற்றும் நிலைப்புத்தன்மை மதிப்பீடு

• SYBR Green அல்லது TaqMan வேதியியலைப் பயன்படுத்தி qPCR பெருக்கத்தைச் செய்யவும்.
• அனைத்து மாதிரிகளிலும் ஒவ்வொரு வேட்பாளர் மரபணுவிற்கும் Cq மதிப்புகளைப் பதிவுசெய்து பகுப்பாய்வு செய்யுங்கள்.
• சிறப்பு அல்காரிதம்களைப் பயன்படுத்தவும் (எ.கா., geNorm, நார்ம்ஃபைண்டர், சிறந்த கீப்பர்) வெளிப்பாடு நிலைத்தன்மையை மதிப்பிடுவதற்கு மற்றும் மிகவும் நிலையான குறிப்பு மரபணுவைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்(கள்).

3. டிரான்ஸ்ஜெனிக் ஆராய்ச்சியில் பயன்பாடுகள்

மரபணு மாற்றப்பட்ட அரிசி ஆய்வுகளில் பல்வேறு பயன்பாடுகளுக்கு சரிபார்க்கப்பட்ட குறிப்பு மரபணுக்கள் முக்கியமானவை:

3.1டிரான்ஸ்ஜீன் நகல் எண்ணை தீர்மானித்தல்

qPCR அல்லது டிஜிட்டல் PCR ஐப் பயன்படுத்தவும் (dPCR) அரிசி மரபணுவில் உள்ள ஒருங்கிணைந்த டி-டிஎன்ஏவின் நகல் எண்ணை அளவுகோலாகக் கண்டறிய ஒரு அளவுகோலாக ஒற்றை நகல் குறிப்பு மரபணுவைக் கொண்டு.

3.2ஹோமோசைகஸ் டிரான்ஸ்ஜெனிக் கோடுகளின் விரைவான திரையிடல்

குறிப்பு மற்றும் டிரான்ஸ்ஜீன் சிக்னல்களை ஒப்பிடும் qPCR பகுப்பாய்வைப் பயன்படுத்தவும் (எ.கா., ΔΔCt முறை மூலம்) T1 தலைமுறையில் ஹோமோசைகஸ் ஒற்றை செருகும் கோடுகளை துல்லியமாக அடையாளம் காண, இனப்பெருக்க செயல்முறையை கணிசமாக துரிதப்படுத்துகிறது.

3.3டிரான்ஸ்ஜீன் வெளிப்பாடு நிலைகளின் பகுப்பாய்வு

செயல்பாட்டு ஆய்வுகளில், வெவ்வேறு டிரான்ஸ்ஜெனிக் கோடுகள் முழுவதும் டிரான்ஸ்ஜீன் டிரான்ஸ்கிரிப்ட் அளவை துல்லியமாக அளவிட, இயல்பாக்கத்திற்கு நிலையான குறிப்பு மரபணுக்களைப் பயன்படுத்தவும்.

3.4டிரான்ஸ்ஜெனிக் கூறுகளைக் கண்டறிதல்

கண்டறியும் அமைப்புகளில், டிஎன்ஏ பிரித்தெடுத்தல் தரம் மற்றும் PCR செயல்திறனைக் கண்காணிக்க குறிப்பு மரபணுக்கள் உள் நேர்மறை கட்டுப்பாடுகளாக செயல்படுகின்றன. மல்டிபிளக்ஸ் நிகழ்நேர பிசிஆர் முறைகளை ஒரே நேரத்தில் இலக்கு டிரான்ஸ்ஜீன்களைக் கண்டறிய உருவாக்கலாம் (எ.கா., ஊக்குவிப்பவர், டெர்மினேட்டர், மார்க்கர் மரபணுக்கள்) மற்றும் குறிப்பு மரபணு, உயர்-செயல்திறன் பகுப்பாய்வை செயல்படுத்துகிறது.

4. திட்ட பரிசீலனைகள்

திட்டத்தின் வெற்றி மற்றும் முடிவு நம்பகத்தன்மையை உறுதி செய்ய, பின்வருவனவற்றை கடைபிடிக்கவும்:

4.1 பொருத்தமான கட்டுப்பாடுகளைச் சேர்க்கவும்

எப்போதும் நேர்மறைக் கட்டுப்பாடுகளைச் சேர்க்கவும் (எ.கா., இலக்கு வரிசைகள் கொண்ட பிளாஸ்மிட்கள்) மற்றும் எதிர்மறை கட்டுப்பாடுகள் (வார்ப்புரு இல்லாத கட்டுப்பாடுகள்) தவறான நேர்மறைகள்/எதிர்மறைகளை நிராகரிக்க PCR மதிப்பீடுகளில்.

4.2 குறிப்பு மரபணுக்களின் தொடர்ச்சியான மேம்படுத்தல்

எந்த குறிப்பு மரபணுவும் உலகளவில் சரியானது அல்ல. மிகவும் பொருத்தமான குறிப்பு மரபணுவை மீண்டும் சரிபார்க்கவும் அல்லது திரையிடவும்(கள்) குறிப்பிட்ட சோதனை நிலைமைகளின் கீழ்.

4.3 தொடர்புடைய தரநிலைகளை கடைபிடித்தல்

ஆராய்ச்சியில் மரபணு மாற்றப்பட்ட கூறுகளைக் கண்டறிவதாக இருந்தால், பொருந்தக்கூடிய தேசியத்தைப் பின்பற்றவும் (எ.கா., ஜிபி/டி தொடர்) அல்லது சர்வதேச (எ.கா., ISO தரநிலைகள்) நடைமுறை இணக்கத்தை உறுதி செய்வதற்கான வழிகாட்டுதல்கள்.

5. திட்டப்பணியின் சுருக்கம்

ஒரு குறிப்பு மரபணு அடையாள திட்டத்திற்கான முறையான அணுகுமுறை பின்வருமாறு:

• ஆராய்ச்சி நோக்கத்தை வரையறுக்கவும்: உலகளாவிய குறிப்பு மரபணு தேவையா அல்லது குறிப்பிட்ட நிபந்தனைகளுக்கு ஒன்று தேவையா என்பதை தெளிவுபடுத்தவும் (எ.கா., குறிப்பிட்ட திசு, மன அழுத்தம்).
• வேட்பாளர் மரபணுக்களைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்: இலக்கியம் மற்றும் தரவுத்தளச் சுரங்கத்தின் அடிப்படையில் வேட்பாளர் மரபணுக்களின் தொகுப்பைத் தேர்வு செய்யவும்.
• நிலைத்தன்மையை சரிபார்க்கவும்: மிகவும் நிலையாக வெளிப்படுத்தப்பட்ட மரபணுவை பரிசோதனை ரீதியாக மதிப்பீடு செய்து அடையாளம் காணவும்(கள்) பிரதிநிதி மாதிரி தொகுப்பில் qPCR மற்றும் உயிர் தகவலியல் கருவிகளைப் பயன்படுத்துதல்.
• ஆராய்ச்சியில் விண்ணப்பிக்கவும்: சரிபார்க்கப்பட்ட குறிப்பு மரபணுவை செயல்படுத்தவும்(கள்) நடைமுறையில் டிரான்ஸ்ஜெனிக் அரிசி ஆராய்ச்சி பயன்பாடுகளில்.

சப்ளையர்

ஷாங்காய் லிங்ஜுன் பயோடெக்னாலஜி கோ., லிமிடெட்இல் நிறுவப்பட்டது 2016 உயிர் காந்த பொருட்கள் மற்றும் நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் உலைகளின் தொழில்முறை உற்பத்தியாளர்.

நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் சுத்திகரிப்பு ஆகியவற்றில் எங்களுக்கு சிறந்த அனுபவம் உள்ளது, புரத சுத்திகரிப்பு, செல் பிரிப்பு, இரசாயன ஒளிர்வு, மற்றும் பிற தொழில்நுட்ப துறைகள்.

எங்கள் தயாரிப்புகள் பல துறைகளில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, மருத்துவ பரிசோதனை போன்றவை, மரபணு சோதனை, பல்கலைக்கழக ஆராய்ச்சி, மரபணு இனப்பெருக்கம், மற்றும் பல. நாங்கள் தயாரிப்புகளை வழங்குவது மட்டுமல்லாமல் OEM ஐயும் மேற்கொள்ள முடியும், ODM, மற்றும் பிற தேவைகள். உங்களுக்கு தொடர்புடைய தேவை இருந்தால், தயவு செய்து எங்களை தொடர்பு கொள்ளவும் .