المهنية في صناعة الخرز المغناطيسي الحيوي
ما الذي يجب الانتباه إليه في طريقة الخرزة المغناطيسية لاستخراج الحمض النووي الريبي (RNA) من الدم?
احتياطات لاستخراج الحمض النووي الريبي (RNA) للدم القائم على الخرز المغناطيسي
1. جمع العينات والتعامل معها
1.1 اختيار مضادات التخثر
المفضل: إدتا，يمنع nucleases المعتمدة على الكالسيوم.
مقبول: حوار التعاون الآسيوي
يتجنب: الهيبارين (يمنع التطبيقات المتلقين للمعلومات)
1.2 معالجة الجدول الزمني
معالجة العينات مباشرة بعد جمعها
إذا تأخر:
قم بتخزين الدم الكامل المضاد للتخثر عند درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة ≥24 ساعة
للتخزين على المدى الطويل: تجميد PBMCs أو المحللة عند -70 درجة مئوية
1.3 حجم العينة
اتبع بدقة الكميات الموصى بها من قبل الشركة المصنعة
1.4 تقنية الخلط
استخدام بيبيتينج لطيف/دوامة لمنع تدهور الحمض النووي الريبي
1.5 إزالة كريات الدم الحمراء
ضمان تحلل كرات الدم الحمراء بالكامل وإزالة بقايا الهيموجلوبين
2. مرحلة التحلل
2.1 تحلل الخلية
التجانس حتى تبقى أية مجاميع الخلية
الالتزام بوقت الحضانة/درجة الحرارة المحددة
2.2 تثبيط ريبونوكلياز
استخدام المخزن المؤقت تحلل الطازجة التي تحتوي على مواد مشوهة (على سبيل المثال, أملاح الجوانيدينيوم)
الحفاظ على العينات على الجليد أثناء المعالجة
2.3 الحمض النووي الريبي الناقل
أضف الجزيئات الحاملة (على سبيل المثال, الجليكوجين) للعينات منخفضة الإنتاجية عند تحديدها
3. تجليد وغسل الخرزة المغناطيسية
3.1 ربط الحمض النووي بالخرز
خطوة حاسمة: دوامة ≥30 ثانية مباشرة بعد إضافة الخرز
احتضان لمدة محددة لكل بروتوكول
3.2 الفصل المغناطيسي
ضع الأنابيب في الحامل المغناطيسي لمدة ≥2 دقيقة حتى يختفي المحلول
نضح طاف دون الاتصال بيليه حبة
3.3 إجراء الغسيل
استخدام مخازن الغسيل المستندة إلى الإيثانول الطازجة
غسل 1: إزالة الأملاح والملوثات
غسل 2 (خياري): عازلة خاصة بالمجموعة لتعزيز النقاء
الغسيل النهائي: ضمان إزالة الإيثانول كاملة (حبات الهواء الجاف 2-5 دقيقة)
4. مرحلة الشطف
4.1 شروط الشطف
استخدام المياه خالية من نوكلياز أو العازلة TE (الرقم الهيدروجيني 8.0)
احتضان عند 55-65 درجة مئوية لمدة 5 دقيقة مع الخلط الدوري
4.2 استعادة الحمض النووي الريبي
إجراء الفصل المغناطيسي النهائي
نقل المادة طافية إلى أنبوب جديد خالي من RNase
5. مراقبة الجودة والتخزين
5.1 تقييم النقاء
أ<الفرعية>260/280</الفرعية>: 1.8-2.1
أ<الفرعية>260/230</الفرعية>: >2.0
5.2 التحقق من النزاهة
الرحلان الكهربائي: نطاقات الرنا الريباسي 28S/18S المميزة (2:1 نسبة)
رين (رقم سلامة الحمض النووي الريبي (RNA).): ≥7 لمعظم التطبيقات
5.3 فحص تلوث gDNA
تشمل خطوة الهضم الدناز إذا لزم الأمر لفحوصات المصب
5.4 تخزين
قسامة الحمض النووي الريبي
يُخزن في درجة حرارة -80 درجة مئوية; يتجنب >3 دورات التجميد والذوبان
تذكيرات حرجة
أنابيب EDTA ضرورية لتثبيط نوكلياز
المعالجة الفورية تمنع تدهور الحمض النووي الريبي (RNA).
إزالة الإيثانول الكاملة إلزامية قبل الشطف
بيئة خالية من RNase: قفازات, نصائح الحاجز, والأسطح المطهرة
التحقق من توافق المجموعة مع نوع العينة (على سبيل المثال, يتطلب الدم المجهز بالهيبارين مجموعات متخصصة)
مزود
شركة شنغهاي لينغجون للتكنولوجيا الحيوية, المحدودة.تأسست في 2016 وهي شركة متخصصة في تصنيع المواد المغناطيسية الحيوية وكواشف استخلاص الحمض النووي.
لدينا خبرة غنية في استخراج وتنقية الحمض النووي, تنقية البروتين, فصل الخلايا, التألق الكيميائي, وغيرها من المجالات التقنية.
منتجاتنا تستخدم على نطاق واسع في العديد من المجالات, مثل الفحوصات الطبية, الاختبارات الجينية, البحوث الجامعية, التكاثر الوراثي, وهكذا. نحن لا نقدم المنتجات فحسب، بل يمكننا أيضًا إجراء تصنيع المعدات الأصلية, أوديإم, وغيرها من الاحتياجات. إذا كان لديك حاجة ذات صلة, لا تتردد في الاتصال بنا .
