रक्त आरएनए निष्कर्षण की चुंबकीय मनका विधि में किन बातों पर ध्यान देना चाहिए??

Precautions for Magnetic Bead-Based Blood RNA Extraction

1. नमूना संग्रह और हैंडलिंग

1.1 Anticoagulant Selection

Preferred: EDTA，कैल्शियम-निर्भर न्यूक्लिअस को रोकता है.

स्वीकार्य: ACD

Avoid: हेपरिन (डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों को रोकता है)

1.2 Processing Timeline

Process samples immediately after collection

If delayed:

Store anticoagulated whole blood at 4°C for ≤24 h

For long-term storage: Freeze PBMCs or lysate at ≤-70°C

1.3 नमूना मात्रा

Strictly follow manufacturer-recommended volumes

1.4 Mixing Technique

Use gentle pipetting/vortexing to prevent RNA degradation

1.5 Erythrocyte Removal

Ensure complete RBC lysis and removal of hemoglobin residues

2. Lysis Phase

2.1 Cell Lysis

Homogenize until no cell aggregates remain

Adhere to specified incubation time/temperature

2.2 RNase निषेध

Use fresh lysis buffer containing denaturants (जैसे, guanidinium salts)

Maintain samples on ice during processing

2.3 Carrier RNA

Add carrier molecules (जैसे, glycogen) for low-yield samples when specified

3. Magnetic Bead Binding and Washing

3.1 Bead-Nucleic Acid Binding

महत्वपूर्ण कदम: Vortex ≥30 sec immediately after adding beads

Incubate for exact duration per protocol

3.2 चुंबकीय पृथक्करण

Place tubes in magnetic stand for ≥2 min until solution clears

Aspirate supernatant without contacting bead pellet

3.3 Washing Procedure

Use freshly prepared ethanol-based wash buffers

धोना 1: Remove salts and contaminants

धोना 2 (optional): Kit-specific buffer for purity enhancement

Final wash: Ensure complete ethanol removal (air-dry beads 2-5 मिन)

4. Elution Phase

4.1 निक्षालन की शर्तें

Use nuclease-free water or TE buffer (पीएच 8.0)

Incubate at 55–65°C for 5 min with periodic mixing

4.2 RNA Recovery

Perform final magnetic separation

Transfer supernatant to new RNase-free tube

5. Quality Control and Storage

5.1 Purity Assessment

ए_260/280: 1.8–2.1

ए_260/230: >2.0

5.2 Integrity Verification

Electrophoresis: Distinct 28S/18S rRNA bands (2:1 अनुपात)

रिन (आरएनए इंटीग्रिटी नंबर): ≥7 for most applications

5.3 gDNA Contamination Check

Include DNase digestion step if required for downstream assays

5.4 भंडारण

Aliquot RNA

Store at –80°C; avoid >3 freeze-thaw cycles

Critical Reminders

EDTA tubes are essential for nuclease inhibition

Immediate processing prevents RNA degradation

Complete ethanol removal is mandatory before elution

RNase-free environment: Gloves, barrier tips, and decontaminated surfaces

Validate kit compatibility with sample type (जैसे, heparinized blood requires specialized kits)

देने वाला

शंघाई लिंगजुन बायोटेक्नोलॉजी कंपनी, लिमिटेडमें स्थापित किया गया था 2016 जो बायोमैग्नेटिक सामग्रियों और न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण अभिकर्मकों का एक पेशेवर निर्माता है.

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