Hva bør vi være oppmerksom på i den magnetiske perlemetoden for blod-RNA-ekstraksjon?

Forholdsregler for magnetisk perlebasert blod-RNA-ekstraksjon

1. Prøveinnsamling og håndtering

1.1 Antikoagulant utvalg

Foretrukket: EDTA，hemmer kalsiumavhengige nukleaser.

Akseptabel: ACD

Unngå: Heparin (hemmer nedstrømsapplikasjoner)

1.2 Behandlingstidslinje

Behandle prøver umiddelbart etter innsamling

Hvis forsinket:

Oppbevar antikoagulert fullblod ved 4°C i ≤24 timer

For langtidslagring: Frys PBMC-er eller lysat ved ≤-70 °C

1.3 Prøvevolum

Følg nøye produsentens anbefalte volumer

1.4 Blandingsteknikk

Bruk skånsom pipettering/vortexing for å forhindre RNA-nedbrytning

1.5 Fjerning av erytrocytter

Sørg for fullstendig RBC-lyse og fjerning av hemoglobinrester

2. Lysefase

2.1 Cellelyse

Homogeniser til ingen celleaggregater gjenstår

Overhold spesifisert inkubasjonstid/temperatur

2.2 RNase-hemming

Bruk fersk lyseringsbuffer som inneholder denatureringsmidler (f.eks., guanidiniumsalter)

Hold prøvene på is under behandlingen

2.3 Bærer-RNA

Legg til bærermolekyler (f.eks., glykogen) for prøver med lavt utbytte når spesifisert

3. Magnetisk perlebinding og vask

3.1 Perle-nukleinsyrebinding

Kritisk trinn: Vortex ≥30 sek umiddelbart etter tilsetning av perler

Inkuber for nøyaktig varighet per protokoll

3.2 Magnetisk separasjon

Plasser rørene i magnetisk stativ i ≥2 minutter til løsningen er klar

Aspirer supernatanten uten å komme i kontakt med perlepellet

3.3 Vaskeprosedyre

Bruk ferske etanolbaserte vaskebuffere

Vaske 1: Fjern salter og forurensninger

Vaske 2 (valgfri): Sett-spesifikk buffer for forbedring av renhet

Sluttvask: Sørg for fullstendig fjerning av etanol (lufttørke perler 2-5 min)

4. Elueringsfase

4.1 Elueringsbetingelser

Bruk nukleasefritt vann eller TE-buffer (pH 8.0)

Inkuber ved 55–65 °C i 5 min med periodisk blanding

4.2 RNA-gjenoppretting

Utfør endelig magnetisk separasjon

Overfør supernatanten til nytt RNase-fritt rør

5. Kvalitetskontroll og lagring

5.1 Renhetsvurdering

EN_260/280: 1.8–2.1

EN_260/230: >2.0

5.2 Integritetsverifisering

Elektroforese: Distinkte 28S/18S rRNA-bånd (2:1 forhold)

RIN (RNA-integritetsnummer): ≥7 for de fleste bruksområder

5.3 gDNA-kontamineringssjekk

Inkluder DNase-fordøyelsestrinn hvis nødvendig for nedstrømsanalyser

5.4 Lagring

Alikvot RNA

Oppbevares ved –80°C; unngå >3 fryse-tine sykluser

Kritiske påminnelser

EDTA-rør er avgjørende for nukleasehemming

Umiddelbar prosessering forhindrer RNA-nedbrytning

Fullstendig fjerning av etanol er obligatorisk før eluering

RNase-fritt miljø: Hansker, barrierespisser, og dekontaminerte overflater

Bekreft settets kompatibilitet med prøvetypen (f.eks., heparinisert blod krever spesialiserte sett)

Leverandør

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.ble etablert i 2016 som er en profesjonell produsent av biomagnetiske materialer og nukleinsyreekstraksjonsreagenser.

Vi har rik erfaring innen utvinning og rensing av nukleinsyre, proteinrensing, celleseparasjon, kjemiluminescens, og andre tekniske felt.

Våre produkter er mye brukt på mange felt, som medisinsk testing, genetisk testing, universitetsforskning, genetisk avl, og så videre. Vi leverer ikke bare produkter, men kan også påta oss OEM, ODM, og andre behov. Hvis du har et relatert behov, ta gjerne kontakt med oss .