혈액 RNA 추출 시 마그네틱 비드 방식에서 주의할 점?

지침 Magnetic Bead 기반 혈액 RNA 추출용

1. 샘플 수집 및 처리

1.1 항응고제 선택

우선의: EDTA，칼슘 의존성 뉴클레아제를 억제합니다..

허용됨: ACD

피하다: 헤파린 (다운스트림 애플리케이션을 억제합니다.)

1.2 처리 일정

샘플 수집 후 즉시 처리

지연된 경우:

항응고된 전혈을 4°C에서 24시간 이하 동안 보관하십시오.

장기 보관용: PBMC를 냉동하거나 ≤-70°C에서 용해물을 냉동하세요

1.3 샘플량

제조업체가 권장하는 볼륨을 엄격하게 따르세요.

1.4 혼합 기술

RNA 분해를 방지하려면 부드러운 피펫팅/볼텍싱을 사용하세요.

1.5 적혈구 제거

완전한 RBC 용해 및 헤모글로빈 잔류물 제거 보장

2. 용해 단계

2.1 세포 용해

세포 응집체가 남지 않을 때까지 균질화

지정된 배양 시간/온도를 준수하세요.

2.2 RNase 억제

변성제가 포함된 새로운 용해 완충액을 사용하세요. (예를 들어, 구아니디늄염)

처리 중에 샘플을 얼음 위에 유지하십시오.

2.3 캐리어 RNA

캐리어 분자 추가 (예를 들어, 글리코겐) 지정된 경우 저수율 샘플용

3. 자기 비드 바인딩 및 세척

3.1 비드-핵산 결합

중요한 단계: 비드 추가 직후 와류 ≥30초

프로토콜에 따라 정확한 기간 동안 배양하세요.

3.2 자기 분리

용액이 깨끗해질 때까지 튜브를 자기 스탠드에 ≥2분 동안 놓습니다.

비드 펠렛과 접촉하지 않고 상층액을 흡인합니다.

3.3 세탁 절차

새로 준비된 에탄올 기반 세척 완충액을 사용하세요.

씻다 1: 염분 및 오염물질 제거

씻다 2 (선택 과목): 순도 향상을 위한 키트별 버퍼

최종세탁: 완전한 에탄올 제거 보장 (공기 건조 구슬 2-5 분)

4. 용리 단계

4.1 용출 조건

뉴클레아제가 없는 물이나 TE 완충액을 사용하세요. (pH 8.0)

55~65°C에서 배양하세요. 5 주기적으로 혼합하는 분

4.2 RNA 회수

최종 자기분리 수행

상층액을 새로운 RNase-free 튜브로 옮김

5. 품질 관리 및 보관

5.1 순도 평가

에이<보결>260/280</보결>: 1.8-2.1

에이<보결>260/230</보결>: >2.0

5.2 무결성 검증

전기영동: 뚜렷한 28S/18S rRNA 밴드 (2:1 비율)

린 (RNA 무결성 번호): 대부분의 응용 분야에서 ≥7

5.3 gDNA 오염 확인

다운스트림 분석에 필요한 경우 DNase 분해 단계를 포함합니다.

5.4 저장

분취량 RNA

–80°C에서 보관; 피하다 >3 동결-해동 주기

중요한 알림

EDTA 튜브는 뉴클레아제 억제에 필수적입니다.

즉각적인 처리로 RNA 분해 방지

Elution 전 에탄올의 완전한 제거는 필수입니다.

RNase가 없는 환경: 장갑, 장벽 팁, 오염이 제거된 표면

샘플 유형과의 키트 호환성 검증 (예를 들어, 헤파린 처리된 혈액에는 특수 키트가 필요합니다)

공급자

상하이 링쥔 생명공학 유한회사, 주식회사에 설립되었습니다 2016 생체자성재료 및 핵산추출시약 전문제조업체입니다..

핵산 추출 및 정제 분야에서 풍부한 경험을 보유하고 있습니다., 단백질 정제, 세포 분리, 화학발광, 및 기타 기술 분야.

우리의 제품은 많은 분야에서 널리 사용됩니다., 의료 테스트와 같은, 유전자 검사, 대학 연구, 유전자 육종, 등. 우리는 제품을 제공할 뿐만 아니라 OEM도 수행할 수 있습니다., ODM, 그리고 다른 필요. 관련된 필요사항이 있는 경우, 저희에게 연락하게 자유롭게 느끼십시오 .