Worauf sollte bei der Magnetkügelchen-Methode der Blut-RNA-Extraktion geachtet werden??

Vorsichtsmaßnahmen für die magnetische Bead-basierte Blut-RNA-Extraktion

1. Probenentnahme und -handhabung

1.1 Auswahl von Antikoagulanzien

Bevorzugt: EDTA，hemmt kalziumabhängige Nukleasen.

Akzeptabel: ACD

Vermeiden: Heparin (hemmt nachgelagerte Anwendungen)

1.2 Bearbeitungszeitleiste

Verarbeiten Sie die Proben sofort nach der Entnahme

Bei Verspätung:

Lagern Sie antikoaguliertes Vollblut ≤ 24 Stunden lang bei 4 °C

Zur Langzeitlagerung: PBMCs einfrieren oder bei ≤-70 °C lysieren

1.3 Probenvolumen

Halten Sie sich strikt an die vom Hersteller empfohlenen Mengen

1.4 Mischtechnik

Verwenden Sie vorsichtiges Pipettieren/Vortexen, um den RNA-Abbau zu verhindern

1.5 Entfernung von Erythrozyten

Stellen Sie eine vollständige RBC-Lyse und Entfernung von Hämoglobinrückständen sicher

2. Lysephase

2.1 Zelllyse

Homogenisieren, bis keine Zellaggregate mehr vorhanden sind

Halten Sie sich an die angegebene Inkubationszeit/-temperatur

2.2 RNase-Hemmung

Verwenden Sie frischen Lysepuffer, der Denaturierungsmittel enthält (z.B., Guanidiniumsalze)

Bewahren Sie die Proben während der Verarbeitung auf Eis auf

2.3 Träger-RNA

Trägermoleküle hinzufügen (z.B., Glykogen) für Proben mit geringer Ausbeute, sofern angegeben

3. Magnetisches Perlenbinden und Waschen

3.1 Bead-Nukleinsäure-Bindung

Kritischer Schritt: Unmittelbar nach Zugabe der Perlen ≥30 Sek. vortexen

Für die genaue Dauer gemäß Protokoll inkubieren

3.2 Magnetische Trennung

Stellen Sie die Röhrchen ≥2 Minuten lang in den Magnetständer, bis die Lösung klar ist

Überstand absaugen, ohne das Perlenpellet zu berühren

3.3 Waschvorgang

Verwenden Sie frisch zubereitete Waschpuffer auf Ethanolbasis

Waschen 1: Salze und Verunreinigungen entfernen

Waschen 2 (optional): Kitspezifischer Puffer zur Reinheitssteigerung

Letzte Wäsche: Stellen Sie sicher, dass das Ethanol vollständig entfernt wird (Lufttrockene Perlen 2-5 min)

4. Elutionsphase

4.1 Elutionsbedingungen

Verwenden Sie nukleasefreies Wasser oder TE-Puffer (pH-Wert 8.0)

Bei 55–65 °C inkubieren 5 min mit periodischem Mischen

4.2 RNA-Wiederherstellung

Führen Sie die endgültige magnetische Trennung durch

Überstand in ein neues RNase-freies Röhrchen übertragen

5. Qualitätskontrolle und Lagerung

5.1 Reinheitsbewertung

A_260/280: 1.8–2.1

A_260/230: >2.0

5.2 Integritätsüberprüfung

Elektrophorese: Deutliche 28S/18S-rRNA-Banden (2:1 Verhältnis)

RIN (RNA-Integritätsnummer): ≥7 für die meisten Anwendungen

5.3 gDNA-Kontaminationsprüfung

Schließen Sie den DNase-Verdauungsschritt ein, falls dies für nachgeschaltete Tests erforderlich ist

5.4 Lagerung

Aliquotierte RNA

Bei –80 °C lagern; vermeiden >3 Frost-Tau-Zyklen

Kritische Erinnerungen

EDTA-Röhrchen sind für die Nukleasehemmung unerlässlich

Die sofortige Verarbeitung verhindert den RNA-Abbau

Vor der Elution ist eine vollständige Entfernung des Ethanols erforderlich

RNase-freie Umgebung: Handschuhe, Barriere-Tipps, und dekontaminierte Oberflächen

Validieren Sie die Kompatibilität des Kits mit dem Probentyp (z.B., Für heparinisiertes Blut sind spezielle Kits erforderlich)

Anbieter

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.wurde gegründet in 2016 Das ist ein professioneller Hersteller von biomagnetischen Materialien und Nukleinsäure-Extraktionsreagenzien.

Wir verfügen über umfangreiche Erfahrung in der Extraktion und Reinigung von Nukleinsäuren, Proteinreinigung, Zelltrennung, Chemilumineszenz, und anderen technischen Bereichen.

Unsere Produkte werden in vielen Bereichen weit verbreitet eingesetzt, wie zum Beispiel medizinische Tests, Gentests, universitäre Forschung, genetische Zucht, und so weiter. Wir liefern nicht nur Produkte, sondern können auch OEM übernehmen, ODM, und andere Bedürfnisse. Wenn Sie einen entsprechenden Bedarf haben, Nehmen Sie gerne Kontakt zu uns auf .