Wat sollt opmierksam gemaach ginn an der magnetescher Perlenmethod fir Blutt RNA Extraktioun?

Virsiichtsmoosnamen fir magnetesch Bead-baséiert Blutt RNA Extraktioun

1. Sample Sammelen an Ëmgank

1.1 Antikoagulant Selektioun

Preferenz: EDTA，hemmt Kalzium-ofhängeg Nukleasen.

Akzeptabel: ACD

Vermeiden: Heparin (hemmt downstream Uwendungen)

1.2 Veraarbechtung Timeline

Probéiert Echantillon direkt no der Sammlung

Wann Verspéidung:

Späichert antikoaguléiert ganz Blutt bei 4 ° C fir ≤24 Stonnen

Fir laangfristeg Lagerung: Afréiere PBMCs oder lysate bei ≤-70 ° C

1.3 Sample Volume

Strikt befollegen Fabrikant-recommandéiert Bänn

1.4 Mëschung Technik

Benotzt sanft Pipetting / Vortexing fir RNA Degradatioun ze vermeiden

1.5 Erythrozyten Entfernung

Vergewëssert Iech komplett RBC Lysis an Entfernung vun Hämoglobinreschter

2. Lysis Phase

2.1 Zell Lysis

Homogeniséiere bis keng Zellaggregate bleiwen

Halt der spezifizéierter Inkubatiounszäit / Temperatur

2.2 RNase Inhibitioun

Benotzt frësche Lysisbuffer mat Denaturanten (z.B., guanidinium Salzer)

Proben op Äis behalen wärend der Veraarbechtung

2.3 Carrier RNA

Füügt Trägermoleküle derbäi (z.B., Glykogen) fir niddereg nozeginn Echantillon wann uginn

3. Magnéitesch Bead Bindung a Wäschung

3.1 Bead-Nukleinsäure Bindung

Kritesch Schrëtt: Vortex ≥30 Sekonnen direkt nodeems d'Pärelen bäigefüügt ginn

Inkubéiert fir exakt Dauer pro Protokoll

3.2 Magnéitesch Trennung

Setzt d'Tubes am magnetesche Stand fir ≥2 min bis d'Léisung kloer ass

Aspiréiert Supernatant ouni Perlenpellet ze kontaktéieren

3.3 Wäsch Prozedur

Benotzt frësch preparéiert Ethanol-baséiert Wäschbuffer

Wäschen 1: Ewechzehuelen Salzer a kontaminéierte

Wäschen 2 (fakultativ): Kit-spezifesch Puffer fir Rengheet Verbesserung

Finale wäschen: Sécherstellen komplett Ethanol Entfernung (Loft-dréchen Perlen 2-5 min)

4. Elutioun Phase

4.1 Elutioun Konditiounen

Benotzt nukleasefräi Waasser oder TE Puffer (pH 8.0)

Inkubéiert bei 55-65 ° C fir 5 min mat periodesch Vermëschung

4.2 RNA Erhuelung

Maacht final magnetesch Trennung

Transfert Supernatant an en neit RNase-gratis Rouer

5. Qualitéitskontroll a Lagerung

5.1 Puritéit Bewäertung

A_260/280: 1.8-2.1

A_260/230: >2.0

5.2 Integritéit Verifikatioun

Elektrophorese: Verschidde 28S / 18S rRNA Bands (2:1 Verhältnis)

RIN (RNA Integritéit Zuel): ≥7 fir déi meescht Uwendungen

5.3 gDNA Kontaminatioun Check

DNase Verdauungsschrëtt enthalen wann néideg fir Downstream Assays

5.4 Stockage

Aliquot RNA

Store bei -80 ° C; vermeiden >3 Afréiere-Thaw Zyklen

Kritesch Erënnerungen

EDTA Réier si wesentlech fir Nukleasehemmung

Direkt Veraarbechtung verhënnert d'RNA-Degradatioun

Komplett Ethanolentfernung ass obligatoresch virun der Eluéierung

RNase-gratis Ëmfeld: Handschuesch, Barrière Tipps, an dekontaminéiert Flächen

Validéiert Kit Kompatibilitéit mat Probetyp (z.B., hepariniséiert Blutt erfuerdert spezialiséiert Kits)

Fournisseur

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd., Ltd.gouf etabléiert an 2016 deen e professionnelle Hiersteller vu biomagnetesche Materialien an Nukleinsäure Extraktiounsreagenz ass.

Mir hu räich Erfahrung an Nukleinsäure Extraktioun an Offäll, Protein Reinigung, Zell Trennung, Chemilumineszenz, an aner technesch Beräicher.

Eis Produkter gi wäit a ville Beräicher benotzt, wéi medizinesch Tester, genetesch Tester, Universitéit Fuerschung, genetesch Zucht, an esou weider. Mir bidden net nëmmen Produkter, awer och kënnen OEM ënnerhuelen, ODM, an aner Besoinen. Wann Dir e verbonne Besoin hutt, weg fillen gratis eis ze kontaktéieren .