Hvad skal man være opmærksom på i den magnetiske perlemetode til blod-RNA-ekstraktion?

Forholdsregler til magnetisk perle-baseret blod-RNA-ekstraktion

1. Prøveindsamling og håndtering

1.1 Valg af antikoagulant

Foretrukken: EDTA，hæmmer calcium-afhængige nukleaser.

Acceptabelt: ACD

Undgå: Heparin (hæmmer downstream-applikationer)

1.2 Behandlingstidslinje

Behandle prøver umiddelbart efter indsamling

Hvis forsinket:

Opbevar antikoaguleret fuldblod ved 4°C i ≤24 timer

Til langtidsopbevaring: Frys PBMC'er eller lysat ved ≤-70°C

1.3 Prøvevolumen

Følg nøje producentens anbefalede mængder

1.4 Blandingsteknik

Brug forsigtig pipettering/vortexing for at forhindre RNA-nedbrydning

1.5 Fjernelse af erytrocytter

Sørg for fuldstændig RBC-lyse og fjernelse af hæmoglobinrester

2. Lysefase

2.1 Cellelyse

Homogeniser indtil ingen celleaggregater er tilbage

Overhold den specificerede inkubationstid/temperatur

2.2 RNase-hæmning

Brug frisk lyseringsbuffer indeholdende denatureringsmidler (f.eks., guanidiniumsalte)

Hold prøver på is under forarbejdning

2.3 Bærer-RNA

Tilføj bærermolekyler (f.eks., glykogen) for prøver med lavt udbytte, når det er specificeret

3. Magnetisk perlebinding og vask

3.1 Perle-nukleinsyrebinding

Kritisk skridt: Vortex ≥30 sek umiddelbart efter tilføjelse af perler

Inkuber i nøjagtig varighed pr. protokol

3.2 Magnetisk adskillelse

Placer rørene i magnetisk stativ i ≥2 minutter, indtil opløsningen er klar

Aspirer supernatanten uden at komme i kontakt med perlepellet

3.3 Vaskeprocedure

Brug frisklavede ethanol-baserede vaskebuffere

Vask 1: Fjern salte og forurenende stoffer

Vask 2 (valgfri): Kit-specifik buffer til forbedring af renheden

Afsluttende vask: Sørg for fuldstændig fjernelse af ethanol (lufttørre perler 2-5 min)

4. Elueringsfase

4.1 Elueringsbetingelser

Brug nukleasefrit vand eller TE-buffer (pH 8.0)

Inkuber ved 55-65°C i 5 min med periodisk blanding

4.2 RNA-gendannelse

Udfør endelig magnetisk adskillelse

Overfør supernatanten til et nyt RNase-frit rør

5. Kvalitetskontrol og opbevaring

5.1 Renhedsvurdering

EN_260/280: 1.8–2.1

EN_260/230: >2.0

5.2 Integritetsverifikation

Elektroforese: Distinkte 28S/18S rRNA-bånd (2:1 forhold)

RIN (RNA-integritetsnummer): ≥7 for de fleste applikationer

5.3 gDNA-kontamineringskontrol

Inkluder DNase-fordøjelsestrin, hvis det er nødvendigt for downstream-assays

5.4 Opbevaring

Alikvot RNA

Opbevares ved –80°C; undgå >3 fryse-tø-cyklusser

Kritiske påmindelser

EDTA-rør er afgørende for nukleaseinhibering

Øjeblikkelig behandling forhindrer RNA-nedbrydning

Fuldstændig fjernelse af ethanol er obligatorisk før eluering

RNase-frit miljø: Handsker, barrierespidser, og dekontaminerede overflader

Valider sættets kompatibilitet med prøvetypen (f.eks., hepariniseret blod kræver specialiserede sæt)

Leverandør

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.blev etableret i 2016 som er en professionel producent af biomagnetiske materialer og nukleinsyreekstraktionsreagenser.

Vi har stor erfaring med udvinding og oprensning af nukleinsyre, proteinoprensning, celleadskillelse, kemiluminescens, og andre tekniske områder.

Vores produkter er meget udbredt inden for mange områder, såsom medicinsk test, genetisk testning, universitetsforskning, genetisk avl, og så videre. Vi leverer ikke kun produkter, men kan også påtage os OEM, ODM, og andre behov. Hvis du har et relateret behov, er du velkommen til at kontakte os .