磁気ビーズ法による血液RNA抽出で注意すべきこと?

予防 磁気ビーズベースの血液 RNA 抽出用

1. サンプルの収集と取り扱い

1.1 抗凝固剤の選択

好ましい: EDTA，カルシウム依存性ヌクレアーゼを阻害します.

許容できる: ACD

避ける: ヘパリン (下流のアプリケーションを阻害します)

1.2 処理タイムライン

採取後すぐにサンプルを処理する

遅れた場合:

抗凝固処理した全血を 4°C で 24 時間以内保存します

長期保管用: PBMC またはライセートを -70°C 以下で凍結します。

1.3 サンプル量

メーカー推奨の容量を厳守してください

1.4 混合技術

RNA の分解を防ぐために、穏やかなピペッティング/ボルテックスを使用してください。

1.5 赤血球の除去

赤血球を完全に溶解し、ヘモグロビン残留物を除去します。

2. 溶解期

2.1 細胞溶解

細胞凝集物がなくなるまで均質化する

指定されたインキュベーション時間/温度を遵守してください

2.2 RNase阻害

変性剤を含む新鮮な溶解バッファーを使用してください (例えば, グアニジニウム塩)

処理中はサンプルを氷上に維持します

2.3 キャリアRNA

キャリア分子を追加する (例えば, グリコーゲン) 指定されている場合、低収量サンプル用

3. 磁気ビーズの結合と洗浄

3.1 ビーズと核酸の結合

重要なステップ: ビーズ添加直後に 30 秒以上ボルテックスします

プロトコールごとに正確な期間インキュベートします

3.2 磁気分離

溶液が透明になるまでチューブを磁気スタンドに 2 分間以上置きます

ビーズペレットに接触せずに上清を吸引します

3.3 洗浄手順

新しく調製したエタノールベースの洗浄バッファーを使用してください

ウォッシュ 1: 塩分や汚染物質を除去する

ウォッシュ 2 (オプション): 純度向上のためのキット固有のバッファー

最終洗浄: エタノールを完全に除去する (空気乾燥ビーズ 2-5 分)

4. 溶出段階

4.1 溶出条件

ヌクレアーゼフリーの水または TE バッファーを使用してください (pH 8.0)

55 ～ 65°C でインキュベートします。 5 定期的な混合で最小

4.2 RNAの回収

最終的な磁気分離を実行する

上清を新しい RNase フリー チューブに移します。

5. 品質管理と保管

5.1 純度評価

あ<サブ>260/280</サブ>: 1.8–2.1

あ<サブ>260/230</サブ>: >2.0

5.2 完全性の検証

電気泳動: 明確な 28S/18S rRNA バンド (2:1 比率)

リン (RNA 完全性番号): ほとんどのアプリケーションでは ≥7

5.3 gDNAコンタミネーションチェック

ダウンストリームアッセイに必要な場合は、DNase 消化ステップを含めます

5.4 ストレージ

RNA のアリコート

-80℃で保存; 避ける >3 凍結融解サイクル

重要なリマインダー

EDTA チューブはヌクレアーゼ阻害に不可欠です

即時処理により RNA の分解を防止

溶出前にエタノールを完全に除去することが必須です

RNaseフリー環境: 手袋, バリアチップ, および除染された表面

サンプルタイプとキットの互換性を検証する (例えば, ヘパリン添加血液には特殊なキットが必要です)

サプライヤー

上海霊軍生物技術有限公司, 株式会社に設立されました 2016 生体磁性材料と核酸抽出試薬の専門メーカーです.

核酸抽出・精製の経験が豊富です。, タンパク質の精製, 細胞分離, 化学発光, その他の技術分野.

当社の製品はさまざまな分野で広く使用されています, 医療検査など, 遺伝子検査, 大学の研究, 遺伝子育種, 等々. 製品のご提供だけでなくOEMも承ります, ODM, その他のニーズ. 関連するニーズがある場合, お気軽にお問い合わせください .