À quoi faut-il faire attention dans la méthode des billes magnétiques pour l'extraction de l'ARN sanguin?

Précautions pour l'extraction d'ARN sanguin à base de billes magnétiques

1. Prélèvement et manipulation des échantillons

1.1 Sélection d'anticoagulants

Préféré: EDTA，inhibe les nucléases dépendantes du calcium.

Acceptable: ACD

Éviter: Héparine (inhibe les applications en aval)

1.2 Chronologie du traitement

Traiter les échantillons immédiatement après le prélèvement

En cas de retard:

Conserver le sang total anticoagulé à 4 °C pendant ≤ 24 h

Pour un stockage à long terme: Congeler les PBMC ou le lysat à ≤-70°C

1.3 Volume de l'échantillon

Suivre strictement les volumes recommandés par le fabricant

1.4 Technique de mélange

Utiliser un pipetage/vortex doux pour éviter la dégradation de l’ARN

1.5 Élimination des érythrocytes

Assurer la lyse complète des globules rouges et l’élimination des résidus d’hémoglobine

2. Phase de lyse

2.1 Lyse cellulaire

Homogénéiser jusqu'à ce qu'il ne reste plus d'agrégats cellulaires

Respecter la durée/température d'incubation spécifiée

2.2 Inhibition de la RNase

Utiliser un tampon de lyse frais contenant des dénaturants (par ex., sels de guanidinium)

Conserver les échantillons sur la glace pendant le traitement

2.3 ARN porteur

Ajouter des molécules porteuses (par ex., glycogène) pour les échantillons à faible rendement lorsque spécifié

3. Reliure et lavage de perles magnétiques

3.1 Liaison perle-acide nucléique

Étape critique: Vortexer ≥30 secondes immédiatement après avoir ajouté des billes

Incuber pendant la durée exacte selon le protocole

3.2 Séparation magnétique

Placer les tubes sur un support magnétique pendant ≥2 min jusqu'à ce que la solution soit claire

Aspirer le surnageant sans entrer en contact avec les billes

3.3 Procédure de lavage

Utilisez des tampons de lavage à base d'éthanol fraîchement préparés

Laver 1: Élimine les sels et les contaminants

Laver 2 (facultatif): Tampon spécifique au kit pour l'amélioration de la pureté

Lavage final: Assurer l’élimination complète de l’éthanol (perles séchées à l'air 2-5 min)

4. Phase d'élution

4.1 Conditions d'élution

Utilisez de l’eau sans nucléase ou un tampon TE (pH 8.0)

Incuber à 55–65°C pendant 5 min avec mélange périodique

4.2 Récupération d'ARN

Effectuer la séparation magnétique finale

Transférer le surnageant vers un nouveau tube sans RNase

5. Contrôle qualité et stockage

5.1 Évaluation de la pureté

UN<sous>260/280</sous>: 1.8–2.1

UN<sous>260/230</sous>: >2.0

5.2 Vérification de l'intégrité

Électrophorèse: Bandes distinctes d'ARNr 28S/18S (2:1 rapport)

NIR (Numéro d'intégrité de l'ARN): ≥7 pour la plupart des applications

5.3 Vérification de la contamination de l'ADNg

Inclure l'étape de digestion de la DNase si nécessaire pour les analyses en aval

5.4 Stockage

ARN aliquot

Conserver à –80°C; éviter >3 cycles de gel-dégel

Rappels critiques

Les tubes EDTA sont essentiels pour l'inhibition des nucléases

Un traitement immédiat empêche la dégradation de l’ARN

L’élimination complète de l’éthanol est obligatoire avant l’élution

Environnement sans RNase: Gants, conseils barrières, et surfaces décontaminées

Valider la compatibilité du kit avec le type d'échantillon (par ex., le sang hépariné nécessite des kits spécialisés)

Fournisseur

Société de biotechnologie Shanghai Lingjun., Ltd.a été établi en 2016 qui est un fabricant professionnel de matériaux biomagnétiques et de réactifs d'extraction d'acide nucléique.

Nous avons une riche expérience dans l'extraction et la purification des acides nucléiques, purification des protéines, séparation cellulaire, chimiluminescence, et autres domaines techniques.

Nos produits sont largement utilisés dans de nombreux domaines, comme les tests médicaux, tests génétiques, recherche universitaire, sélection génétique, et ainsi de suite. Nous fournissons non seulement des produits, mais pouvons également entreprendre des OEM, ODM, et autres besoins. Si vous avez un besoin connexe, n'hésitez pas à nous contacter .