Waar moet op worden gelet bij de magnetische kralenmethode voor bloed-RNA-extractie?

Voorzorgsmaatregelen voor magnetische kralengebaseerde bloed-RNA-extractie

1. Monsterverzameling en -behandeling

1.1 Selectie van antistollingsmiddelen

Voorkeur: EDTA，remt calcium-afhankelijke nucleasen.

Aanvaardbaar: ACD

Voorkomen: Heparine (verhindert downstream-toepassingen)

1.2 Verwerkingstijdlijn

Verwerk monsters onmiddellijk na verzameling

Indien vertraagd:

Bewaar ontstold volbloed bij 4 °C gedurende ≤24 uur

Voor langdurige opslag: Bevries PBMC's of lysaat bij ≤-70°C

1.3 Monstervolume

Volg strikt de door de fabrikant aanbevolen volumes

1.4 Mengtechniek

Gebruik voorzichtig pipetteren/vortexen om RNA-afbraak te voorkomen

1.5 Erytrocyten verwijderen

Zorg voor volledige RBC-lyse en verwijdering van hemoglobineresiduen

2. Lysis fase

2.1 Cellysis

Homogeniseer totdat er geen celaggregaten meer over zijn

Houd u aan de gespecificeerde incubatietijd/temperatuur

2.2 RNase-remming

Gebruik verse lysisbuffer die denaturanten bevat (bijv., guanidiniumzouten)

Bewaar monsters op ijs tijdens de verwerking

2.3 Drager-RNA

Voeg dragermoleculen toe (bijv., glycogeen) voor monsters met een lage opbrengst, indien gespecificeerd

3. Magnetische kralen binden en wassen

3.1 Kraal-nucleïnezuurbinding

Cruciale stap: Vortex ≥30 sec onmiddellijk na het toevoegen van kralen

Incubeer voor de exacte duur per protocol

3.2 Magnetische scheiding

Plaats de buisjes gedurende ≥2 minuten in een magnetische standaard totdat de oplossing helder is

Zuig het supernatant op zonder in contact te komen met de parelpellet

3.3 Wasprocedure

Gebruik vers bereide wasbuffers op basis van ethanol

Wassen 1: Verwijder zouten en verontreinigingen

Wassen 2 (optioneel): Kit-specifieke buffer voor verbetering van de zuiverheid

Laatste wasbeurt: Zorg voor volledige verwijdering van ethanol (luchtdroge kralen 2-5 min)

4. Elutiefase

4.1 Elutieomstandigheden

Gebruik nucleasevrij water of TE-buffer (pH 8.0)

Incubeer gedurende 55–65°C 5 min. met periodiek mengen

4.2 RNA-herstel

Voer een definitieve magnetische scheiding uit

Breng supernatant over naar een nieuwe RNase-vrije buis

5. Kwaliteitscontrole en opslag

5.1 Zuiverheidsbeoordeling

A_260/280: 1.8–2.1

A_260/230: >2.0

5.2 Integriteitsverificatie

Elektroforese: Duidelijke 28S/18S rRNA-banden (2:1 verhouding)

RIN (RNA-integriteitsnummer): ≥7 voor de meeste toepassingen

5.3 gDNA-besmettingscontrole

Voeg indien nodig een DNase-digestiestap toe voor downstream-assays

5.4 Opslag

Aliquot-RNA

Bewaren bij –80°C; voorkomen >3 vries-dooi cycli

Kritische herinneringen

EDTA-buizen zijn essentieel voor nucleaseremming

Onmiddellijke verwerking voorkomt RNA-afbraak

Volledige verwijdering van ethanol is verplicht vóór elutie

RNase-vrije omgeving: Handschoenen, barrière tips, en gereinigde oppervlakken

Valideer de compatibiliteit van de kit met het monstertype (bijv., gehepariniseerd bloed vereist gespecialiseerde kits)

Leverancier

Shanghai Lingjun Biotechnologie Co., Ltd.werd opgericht in 2016 dat een professionele fabrikant is van biomagnetische materialen en reagentia voor nucleïnezuurextractie.

We hebben een rijke ervaring in de extractie en zuivering van nucleïnezuren, eiwit zuivering, cel scheiding, chemiluminescentie, en andere technische gebieden.

Onze producten worden op veel gebieden veel gebruikt, zoals medische testen, genetische testen, universitair onderzoek, genetische veredeling, enzovoort. Wij leveren niet alleen producten, maar kunnen ook OEM ondernemen, ODM, en andere behoeften. Als u een gerelateerde behoefte heeft, Neem gerust contact met ons op .