Apa yang harus diperhatikan dalam metode manik magnetik ekstraksi RNA darah?

Tindakan pencegahan untuk Ekstraksi RNA Darah Berbasis Manik Magnetik

1. Pengumpulan dan Penanganan Sampel

1.1 Seleksi Antikoagulan

Lebih disukai: EDTA，menghambat nuklease yang bergantung pada kalsium.

Dapat diterima: ACD

Menghindari: Heparin (menghambat aplikasi hilir)

1.2 Garis Waktu Pemrosesan

Proses sampel segera setelah pengumpulan

Jika tertunda:

Simpan darah utuh antikoagulan pada suhu 4°C selama ≤24 jam

Untuk penyimpanan jangka panjang: Bekukan PBMC atau lisat pada suhu ≤-70°C

1.3 Volume Sampel

Ikuti dengan ketat volume yang direkomendasikan pabrikan

1.4 Teknik Pencampuran

Gunakan pemipetan/vorteks yang lembut untuk mencegah degradasi RNA

1.5 Penghapusan Eritrosit

Pastikan lisis sel darah merah lengkap dan pembuangan residu hemoglobin

2. Fase Lisis

2.1 Lisis Sel

Homogenkan sampai tidak ada agregat sel yang tersisa

Patuhi waktu/suhu inkubasi yang ditentukan

2.2 Penghambatan RNase

Gunakan buffer lisis segar yang mengandung denaturant (misalnya, garam guanidinium)

Simpan sampel di atas es selama pemrosesan

2.3 RNA pembawa

Tambahkan molekul pembawa (misalnya, glikogen) untuk sampel hasil rendah bila ditentukan

3. Pengikatan dan Pencucian Manik Magnetik

3.1 Pengikatan Asam Nukleat Manik

Langkah kritis: Vortex ≥30 detik segera setelah menambahkan manik-manik

Inkubasi untuk durasi yang tepat per protokol

3.2 Pemisahan Magnetik

Tempatkan tabung dalam dudukan magnet selama ≥2 menit sampai larutan hilang

Aspirasi supernatan tanpa menyentuh pelet manik

3.3 Prosedur Pencucian

Gunakan buffer pencuci berbahan dasar etanol yang baru disiapkan

Mencuci 1: Hapus garam dan kontaminan

Mencuci 2 (opsional): Buffer khusus kit untuk peningkatan kemurnian

Pencucian terakhir: Pastikan penghilangan etanol sepenuhnya (manik-manik yang dikeringkan di udara 2-5 menit)

4. Fase Elusi

4.1 Kondisi Elusi

Gunakan air bebas nuklease atau buffer TE (pH 8.0)

Inkubasi pada suhu 55–65°C selama 5 menit dengan pencampuran berkala

4.2 Pemulihan RNA

Lakukan pemisahan magnetik akhir

Pindahkan supernatan ke tabung baru bebas RNase

5. Kontrol Kualitas dan Penyimpanan

5.1 Penilaian Kemurnian

A_260/280: 1.8–2.1

A_260/230: >2.0

5.2 Verifikasi Integritas

Elektroforesis: Pita rRNA 28S/18S yang berbeda (2:1 perbandingan)

rin (Nomor Integritas RNA): ≥7 untuk sebagian besar aplikasi

5.3 Pemeriksaan Kontaminasi gDNA

Sertakan langkah pencernaan DNase jika diperlukan untuk pengujian hilir

5.4 Penyimpanan

Aliquot RNA

Simpan pada suhu –80°C; menghindari >3 siklus beku-cair

Pengingat Kritis

Tabung EDTA sangat penting untuk penghambatan nuklease

Pemrosesan segera mencegah degradasi RNA

Penghapusan etanol lengkap adalah wajib sebelum elusi

Lingkungan bebas RNase: Sarung tangan, tip penghalang, dan permukaan yang didekontaminasi

Validasi kompatibilitas kit dengan jenis sampel (misalnya, darah yang diheparinisasi memerlukan peralatan khusus)

Pemasok

Shanghai Lingjun Bioteknologi Co., Ltd.didirikan pada 2016 yang merupakan produsen profesional bahan biomagnetik dan reagen ekstraksi asam nukleat.

Kami memiliki pengalaman yang kaya dalam ekstraksi dan pemurnian asam nukleat, pemurnian protein, pemisahan sel, kimialuminesensi, dan bidang teknis lainnya.

Produk kami banyak digunakan di berbagai bidang, misalnya tes kesehatan, pengujian genetik, penelitian universitas, pemuliaan genetik, dan sebagainya. Kami tidak hanya menyediakan produk tetapi juga dapat melakukan OEM, ODM, dan kebutuhan lainnya. Jika Anda memiliki kebutuhan terkait, jangan ragu untuk menghubungi kami .