Cad ba chóir aird a thabhairt air sa mhodh coirníní maighnéadach d'eastóscadh RNA fola?

Réamhchúraimí le haghaidh Eastóscadh RNA Fola Maighnéadach Feirb-Bhunaithe

1. Bailiú Samplach agus Láimhseáil

1.1 Roghnú Anticoagulant

Is fearr: EDTA，cuireann sé bac ar núicléis atá ag brath ar chailciam.

Inghlactha: ACD

Seachain: Heparin (cuireann sé bac ar iarratais iartheachtacha)

1.2 Amlíne Próiseála

Próiseáil samplaí díreach tar éis iad a bhailiú

Má chuirtear moill air:

Stóráil lánfuil frith-théachtach ag 4°C ar feadh ≤24 h

Le haghaidh stórála fadtéarmach: Reo PBMCanna nó lysate ag ≤-70 ° C

1.3 Toirt Samplach

Lean go docht na méideanna atá molta ag an monaróir

1.4 Teicníc Measctha

Úsáid píobaireacht mhín/vortexing chun díghrádú RNA a chosc

1.5 Deireadh a chur le Erythrocyte

Cinntigh lysis RBC iomlán agus baint iarmhair haemaglóibin

2. Céim Lysis

2.1 Cille Lysis

Homogenize go dtí nach bhfanann comhiomláin cille

Cloí leis an am goir/teocht sonraithe

2.2 Cosc ar RNase

Úsáid maolán lí úr ina bhfuil dínádúraigh (e.g., salainn guanidinium)

Coinnigh samplaí ar oighear le linn próiseála

2.3 RNA Iompróir

Cuir móilíní iompróra leis (e.g., glycogen) le haghaidh samplaí ísealtáirgeachta nuair a shonraítear iad

3. Ceangal agus Níochán Bead Maighnéadach

3.1 Ceangal Bead-Aigéad Núicléach

Céim chriticiúil: Vortex ≥30 sec díreach tar éis coirníní a chur leis

Gor ar feadh ré beacht in aghaidh an phrótacail

3.2 Scaradh Maighnéadach

Cuir na feadáin i seastán maighnéadach ar feadh ≥2 nóiméad go dtí go nglanann an tuaslagán

Sáróstach asúiteach gan teagmháil a dhéanamh le millíní coirníní

3.3 Nós Imeachta Níocháin

Úsáid maoláin níocháin atá bunaithe ar eatánól úrullmhaithe

Nigh 1: Bain salainn agus ábhar salaithe

Nigh 2 (roghnach): Maolán Kit-shonrach le haghaidh feabhsú íonachta

Nigh deiridh: Cinntigh baint iomlán eatánóil (coirníní aer-tirim 2-5 nóim)

4. Céim Elution

4.1 Coinníollacha elution

Úsáid uisce saor ó núicléas nó maolán TE (pH 8.0)

Goir ag 55–65°C le haghaidh 5 min le meascán tréimhsiúil

4.2 Aisghabháil RNA

Déan scaradh maighnéadach deiridh

Aistrigh an feadán go dtí feadán nua saor ó RNase

5. Rialú Cáilíochta agus Stóráil

5.1 Measúnú Íonachta

A<fo>260/280</fo>: 1.8–2.1

A<fo>260/230</fo>: >2.0

5.2 Fíorú Sláine

Leictreafóiréis: Bannaí rRNA ar leith 28S/18S (2:1 cóimheas)

RIN (Uimhir Sláine RNA): ≥7 don chuid is mó d'iarratais

5.3 Seiceáil Éillithe gDNA

Cuir céim díleá DNA san áireamh más gá do thástálacha iartheachtacha

5.4 Stóráil

Aliquot RNA

Stóráil ag -80 ° C; sheachaint >3 timthriallta reo-leá

Meabhrúcháin Chriticiúla

Tá feadáin EDTA riachtanach do chosc ar núicléas

Cuireann próiseáil láithreach cosc ​​ar dhíghrádú RNA

Tá baint iomlán eatánóil éigeantach roimh elution

Timpeallacht saor ó RNase: Lámhainní, leideanna bacainn, agus dromchlaí dí-éillithe

Comhoiriúnacht an trealaimh leis an gcineál sampla a bhailíochtú (e.g., Éilíonn fuil heparinized feisteáin speisialaithe)

Soláthraí

Shanghai Lingjun Biteicneolaíocht Co., Teo.bunaíodh i 2016 atá ina mhonaróir gairmiúil d'ábhair bithmhaighnéadacha agus imoibrithe eastóscadh aigéid núicléacha.

Tá taithí shaibhir againn in eastóscadh agus íonú aigéad núicléasach, íonú próitéine, scaradh cille, ceimileacanacht, agus réimsí teicniúla eile.

Úsáidtear ár gcuid táirgí go forleathan i go leor réimsí, mar thástáil leighis, tástáil ghéiniteach, taighde ollscoile, pórú géiniteach, agus mar sin de. Ní chuirimid ar fáil ach táirgí ach freisin is féidir tabhairt faoi OEM, ODM, agus riachtanais eile. Má tá riachtanas gaolmhar agat, bíodh leisce ort teagmháil a dhéanamh linn .