Straitéisí bunúsacha agus cur i bhfeidhm do shórtáil blúirí DNA

Tá prionsabal íonú coirníní maighnéadacha aigéid núicléacha bunaithe ar theicneolaíocht Díluailithe Inchúlaithe Céim Soladach （SPRI）, nach bhfuil an mheicníocht gníomhaíochta an-soiléir fós ina leith. Is míniú níos eolaíoch í teoiric droichead salainn faoi láthair, is é sin, i dtiúchan níos airde de thuaslagán alcóil agus salainn urghabháil uisce an chiseal hiodráitithe lasmuigh de na móilíní DNA, mar thoradh ar chomhiomlánú móilíní DNA deascadh, ionas go mbeidh na grúpaí fosfáit atá luchtaithe go diúltach nochta. Cruthaíonn na hiain salainn “droichead salainn”, ar a dtugtar freisin "droichead leictreach", leis na grúpaí ar dhromchla na coirníní, rud a fhágann go bhfuil an DNA asaithe ar dhromchla na gcoirníní.

Tá deascadh isopropanol agus eatánóil ró-chumhachtach, mar sin ní úsáidtear sórtáil blúirí de ghnáth, ach polaiméirí neamhionic intuaslagtha in uisce PEG, is é sin, glycol poileitiléin mar deascán, agus mar gheall ar an PEG slaodach ionas go mbeidh na coirníní maighnéadacha sa mhaolán chun fionraí maith a fháil. Sa phróiseas ceangailteach DNA, is féidir teagmháil níos iomláine a dhéanamh leis na coirníní maighnéadacha le DNA, agus níl sé éasca le PEG dínádúrú próitéine agus asaithe neamh-shonrach a chur faoi deara. Mar sin féin, tá tionchar éasca ag pH agus teocht ar éifeacht sil-leagan DNA PEG, agus níl PEG intuaslagtha go héasca in uisce nuair a bhíonn an teocht ró-íseal, mar sin na coirníní maighnéadacha go ginearálta is gá iad a chothromú ag teocht an tseomra roimh úsáid, agus roinnt cobhsaitheoirí pH íseal, mar Tris-HCl, srl., cuirfear leis an maolán coirnín maighnéadach.

Dá fhaide an DNA, nochtar na grúpaí fosfáit atá luchtaithe níos diúltaí ar an dromchla, dá láidre is ea lucht diúltach an mhóilín iomláin, is amhlaidh is fusa é a bheith asaithe do na coirníní maighnéadacha, agus ní gá ach tiúchan níos ísle PEG agus NaCl chun é a ghnóthú; dá giorra atá an DNA, dá airde an tiúchan de PEG agus NaCl is gá a scrios an ciseal hydration ar an dromchla níos críochnúla, agus chun go leor grúpaí fosfáit atá luchtaithe go diúltach a nochtadh chun a bheith asaithe ag na coirníní maighnéadacha, agus dá bhrí sin a ghnóthú. agus dá bhrí sin a ghnóthú ar ais. Mar sin más mian leat blúirí DNA níos giorra a ghnóthú, ní mór duit méid níos mó coirníní maighnéadacha a chur leis (léirithe i bhFíor 1).

Dá bhrí sin, Is é an nós imeachta ginearálta a bhaineann le sórtáil blúirí ná blúirí móra a asú le maolán coirníní caol sa chéad bhabhta, agus ansin cuir maolán coirníní chun na blúirí sonraithe a adsorbú sa dara babhta tar éis supernatant a ghlacadh, chun an DNA ilroinnte atá ag teastáil a fháil. Faoi láthair, úsáideann formhór na scéimeanna sórtála blúirí ar an margadh coirníní carbocsailithe i gcomhcheangal le tiúchain éagsúla ian salainn agus céatadáin PEG chun blúirí de fhaid éagsúla a aisghabháil, ach ar ndóigh, scéim eile atá ann, atá Modh na nAspal den chéad uair blúirí móra a asú le coirníní maighnéadacha carbocsaileacha (Foshraith A a thaispeántar i bhFíor. 2) ag tiúchan áirithe de iain salainn agus PEG, agus ansin blúirí beaga a asú le coirníní maighnéadacha shilice-hiodrocsaileáilte (Foshraith B a thaispeántar i bhFíor. 2) ag tiúchan áirithe de iain salainn agus PEG ^[2].

Is éifeachtach é an modh coirníní maighnéadacha chun blúirí a shórtáil, gasta, agus teicníc an-sonrach, agus tá sórtáil blúirí ar cheann de na príomhchéimeanna sa phróiseas ullmhúcháin leabharlainne NGS. Trí shórtáil blúirí, is féidir leis a chinntiú go gcomhlíonann méid na blúirí DNA sa leabharlann riachtanais an ardáin seicheamhaithe, mar sin feabhsaítear cáilíocht na sonraí seicheamhaithe agus cruinneas na hanailíse. I réimse na diagnóisic mhóilíneach, Úsáidtear teicneolaíocht sórtála blúirí chun íogaireacht agus sainiúlacht an bhraite a fheabhsú. Is féidir coirníní maighnéadacha sórtála blúirí a úsáid freisin chun táirgí PCR a íonú le haghaidh turgnaimh iartheachtacha.

Tagairtí:

[1] LIU D, LIQ, LUO J, srl. Straitéis um íonú DNA atá bunaithe ar choirníní SPRI maidir le solúbthacht agus cost-éifeachtúlacht[J/OL]. Géanómaíocht BMC, 2023, 24(1): 125. DOI:10.1186/s12864-023-09211-w.

[2] ZHANG B, ZHAO S, WAN H, srl. Saibhriú méid DNA ardtaifigh ag baint úsáide as nana-ardán maighnéadach agus feidhmiú i dtástáil réamhbhreithe neamh-ionrach[J/OL]. An Anailísí, 2020, 145(17): 5733-5739. DOI:10.1039/D0AN00813C.

Soláthraí

Shanghai Lingjun Biteicneolaíocht Co., Teo.bunaíodh i 2016 atá ina mhonaróir gairmiúil d'ábhair bithmhaighnéadacha agus imoibrithe eastóscadh aigéid núicléacha.

Tá taithí shaibhir againn in eastóscadh agus íonú aigéad núicléasach, íonú próitéine, scaradh cille, ceimileacanacht, agus réimsí teicniúla eile.

Úsáidtear ár gcuid táirgí go forleathan i go leor réimsí, mar thástáil leighis, tástáil ghéiniteach, taighde ollscoile, pórú géiniteach, agus mar sin de. Ní chuirimid ar fáil ach táirgí ach freisin is féidir tabhairt faoi OEM, ODM, agus riachtanais eile. Má tá riachtanas gaolmhar agat, bíodh leisce ort teagmháil a dhéanamh linn agdíolacháin01@lingjunbio.com.